实用医学杂志 ›› 2021, Vol. 37 ›› Issue (9): 1099-1105.doi: 10.3969/j.issn.1006⁃5725.2021.09.001
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miR⁃330⁃3p靶向丙酮酸激酶M2型对胃癌细胞增殖、凋亡及有氧糖酵解进程调控机制研究
刘磊, 赵羲和, 田忠
中国医科大学附属盛京医院1普通外科,2 肿瘤科(沈阳110023)
Regulation mechanism of miR⁃330⁃3p on proliferation and apoptosis of gastric cancer cells,and aerobicglycolysis process by targeting pyruvate kinase M2
LIU Lei,ZHAO Xihe,TIAN Zhong.
Department of Gen⁃ eral Surgery,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang,110023,China
摘要:
目的 探讨miR⁃330⁃3p靶向丙酮酸激酶M2型(PKM2)基因对胃癌细胞增殖、凋亡及有氧糖酵解进程的影响及机制。方法 采用反转录聚合酶链式反应检测胃癌细胞SGC⁃7901、胃粘膜上皮细胞GES⁃1 miR⁃miR⁃330⁃3p表达水平,将miR⁃NC、miR⁃330⁃3p⁃inhibitor、miR⁃330⁃3p⁃mimcs、miR⁃330⁃3p⁃inhibitor+PKM2⁃NC、miR⁃330⁃3p⁃inhibitor+PKM2⁃shRNA、miR⁃330⁃3p⁃mimcs+LV⁃NC、miR⁃330⁃3p⁃mimcs+LV⁃PKM2转染至胃癌细胞中,采用CCK8 法、Transwell 实验、Annexin V/PI 法分别检测细胞增殖、侵袭、凋亡情况,检测葡萄糖利用率、乳酸生成量、己糖激酶(HK)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性等糖酵解指标,采用Western Blot法检测PKM2、GLUT1、HK2、Bax、Caspase⁃3蛋白的表达,采用双荧光素酶报告基因检测实验检测miR⁃330⁃3p与PKM2的靶向关系。结果 (1)胃癌细胞系miR⁃330⁃3p表达量高于胃粘膜上皮细胞,PKM2表达量低于胃粘膜上皮细胞(P < 0.05)。(2)生物信息学显示,miR⁃330⁃3p与PKM2存在结合位点;荧光素酶报告基因检测结果显示,与miR⁃NC组比较,miR⁃330⁃3p PKM2野生型荧光素酶活性降低(P < 0.05)。(3)与miR⁃NC组比较,miR⁃330⁃3p⁃inhibitor组吸光度值、侵袭细胞数增多,凋亡细胞数减少,细胞葡萄糖消耗量、乳酸生成量、HK活性、LDH活性降低,PKM2、GLUT1、HK2表达升高,促凋亡蛋白Bax、Caspase⁃3表达量降低(P < 0.05),miR⁃330⁃3p⁃inhibitor+PKM2⁃shRNA组升高或降低幅度低于miR⁃330⁃3p⁃inhibitor组(P < 0.05)。(4)与miR⁃NC组比较,miR⁃330⁃3p⁃mimcs 组miR⁃330⁃3p表达量升高(P < 0.05),吸光度值、侵袭细胞数减少,凋亡细胞增多,细胞葡萄糖消耗量、乳酸生成量、HK 活性、LDH 活性升高,PKM2、GLUT1、HK2 表达降低,促凋亡蛋白Bax、Caspase⁃3 表达量升高(P < 0.05);miR⁃330⁃3p⁃mimcs+LV⁃PKM2 组升高或降低趋势低于miR⁃330⁃3p⁃mimcs 组(P < 0.05)。结论 miR⁃330⁃3p 表达与胃癌细胞增殖、凋亡及有氧糖酵解进程相关,可能通过靶向PKM2实现。