HPV16 E6调控miR-23a表达促进宫颈癌细胞侵袭、迁移

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2024.02.004

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨高危型人乳头瘤病毒16 E6蛋白（HPV16 E6蛋白）调控miR-23a表达对宫颈癌细胞SiHa侵袭、迁移的作用。方法选取100例宫颈癌HPV阴性患者、100例HPV阳性患者的组织标本、100例癌旁正常组织；宫颈癌SiHa细胞分为空白组、E6过表达组、阴性转染组、E6+miR-23a mimics组；qRT-PCR法检测miR-23a、HPV16 E6 mRNA表达；MTT法检测增殖抑制率；流式细胞仪检测凋亡；Transwell小室实验检测细胞侵袭；划痕实验检测细胞迁移；WB检测HPV16 E6、凋亡相关蛋白（Caspase-3、Bax、Bcl-2）、迁移相关蛋白（MMP-2、MMP-9）的表达。结果宫颈癌组织中miR-23a表达降低，其中宫颈癌HPV阳性组织中miR-23a表达水平更低。E6过表达降低miR-23a表达水平、细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3、Bax蛋白表达，增高Bcl-2蛋白、划痕愈合率、侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P < 0.05）；miR-23a mimics逆转了E6过表达对上述各项指标的影响。结论 HPV16 E6促进宫颈癌细胞侵袭、迁移可能与调控miR-23a表达有关。

关键词: 人乳头瘤病毒16 E6蛋白, miR-23a, 宫颈癌, 侵袭, 迁移

Abstract:

Objective To investigate the effects of high-risk human papillomavirus 16 E6 protein （HPV16 E6 protein） on invasion and migration of cervical cancer SiHa cells via regulating the expression of expression miR-23a. Methods Tissue samples from 100 patients with cervical cancer HPV-negative， 100 HPV-positive patients， and 100 paracancerous normal tissues were collected； cervical cancer SiHa cells were divided into blank group， E6 overexpression group， negative transfection group， and E6 + miR-23a mimics group. The expression of miR-23a and HPV16 E6 mRNA were detected by qRT-PCR； MTT assay was used to detect the cell proliferation inhibition rate； flow cytometry to detect the apoptosis； Transwell chamber assay to detect cell invasion， and scratch test to detect the ability of cell migration. The expression of HPV16 E6， apoptosis related proteins （Caspase-3， Bax， Bcl-2）， and migration related proteins （MMP-2， MMP-9） was detected by WB. Results The expression level of miR-23a was decreased in cervical cancer tissues， and that was lower in HPV positive cervical cancer tissues. Overexpression of E6 decreased the expression level of miR-23a， cell proliferation inhibition rate， apoptosis rate， Caspase-3 and Bax protein expression， and increased the expression of Bcl-2 protein， scratch healing rate， invasion cell number， MMP-2， MMP-9 protein expression （P < 0.05）； miR-23a mimics reversed the effects of E6 overexpression on the above indicators. Conclusion HPV16 E6 promotes the invasion and migration of cervical cancer cells， which may be related to the regulation of miR-23a expression.

Key words: human papillomavirus 16 E6 protein, miR-23a, cervical cancer, invasion, migration

中图分类号:

R737.33

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图/表 9

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参考文献 26

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组别	HPV16 E6/ β-actin	HPV16 E6/GAPDH	miR-23a/U6
空白组	1.02 ± 0.20	1.01 ± 0.20	1.03 ± 0.21
阴性转染组	1.01 ± 0.19	1.02 ± 0.21	1.03 ± 0.18
E6过表达组	1.56 ± 0.25^ab	1.52 ± 0.24^ab	0.32 ± 0.06^ab
E6+miR-23a mimics组	1.55 ± 0.26^ab	1.54 ± 0.25^ab	0.65 ± 0.13^abc
F值	5.659	5.200	14.494
P值	0.022	0.028	0.001

组别	细胞凋亡率（%）	凋亡相关因子蛋白表达
组别	细胞凋亡率（%）	Caspase-3/GAPDH	Bax/GAPDH	Bcl-2/GAPDH
空白组	18.28 ± 1.23	0.98 ± 0.15	1.03 ± 0.14	0.94 ± 0.07
阴性转染组	19.01 ± 1.25	1.01 ± 0.10	0.99 ± 0.13	1.00 ± 0.08
E6过表达组	8.44 ± 0.75^ab	0.26 ± 0.07^ab	0.30 ± 0.05^ab	1.64 ± 0.11^ab
E6+miR-23a mimics组	15.33 ± 1.01^abc	0.71 ± 0.08^abc	0.65 ± 0.08^abc	1.25 ± 0.09^abc
F值	59.854	33.041	30.685	38.636
P值	0.001	0.000	0.000	0.000

组别	侵袭细胞数（个）	划痕愈合率（%）	细胞侵袭相关蛋白表达
组别	侵袭细胞数（个）	划痕愈合率（%）	MMP-2/GAPDH	MMP-9/GAPDH
空白组	85.40 ± 4.50	19.86 ± 2.11	1.02 ± 0.13	0.96 ± 0.12
阴性转染组	83.70 ± 4.73	18.81 ± 2.01	0.96 ± 0.10	0.93 ± 0.09
E6过表达组	120.94 ± 6.55^ab	31.35 ± 3.07^ab	1.65 ± 0.18^ab	1.61 ± 0.16^ab
E6+miR-23a mimics组	102.66 ± 5.03^abc	25.58 ± 1.03^abc	1.30 ± 0.11^abc	1.29 ± 0.10^abc
F值	32.883	21.194	16.710	21.114
P值	0.000	0.000	0.001	0.000

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