乳腺癌患者外周血中颗粒酶B和穿孔素的表达及意义

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2023.22.003

摘要/Abstract

摘要：

目的分析乳腺癌患者外周血T淋巴细胞及NK细胞中颗粒酶B和穿孔素的表达对乳腺癌的诊断价值，明确颗粒酶B和穿孔素的表达与乳腺癌分子分型、肿瘤分期等临床病理特征的相关性及其对乳腺癌治疗效果的评价。方法应用流式细胞术检测108例乳腺癌和70例乳腺良性疾病患者样本中CD3⁺T细胞、CD8⁺T细胞及NK细胞中颗粒酶B和穿孔素的表达；采用受试者工作特征（ROC）曲线评估各指标对乳腺癌的诊断效能，比较不同临床病理特征乳腺癌患者颗粒酶B和穿孔素的表达及治疗前后各指标的变化。结果乳腺癌患者T淋巴细胞亚群与NK细胞中颗粒酶B和穿孔素表达均高于对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。ROC曲线分析结果显示，CD3⁺T细胞、CD8⁺T细胞及NK细胞中颗粒酶B和穿孔素阳性率的曲线下面积（AUC）大于0.5。CD3⁺T细胞中颗粒酶B和穿孔素的表达与乳腺癌肿瘤大小及临床分期呈正相关（P < 0.05），CD8⁺T细胞中颗粒酶B也与乳腺癌肿瘤大小及临床分期呈正相关（P < 0.05）。乳腺癌患者淋巴结转移组中CD3⁺T细胞中颗粒酶B和穿孔素表达明显高于无淋巴结转移组（P < 0.05）。乳腺癌患者治疗后外周血T淋巴细胞中颗粒酶B和穿孔素表达高于治疗前（P < 0.05）。结论外周血CD3⁺T细胞、CD8⁺T细胞和NK细胞中颗粒酶B及穿孔素的表达对于诊断乳腺癌有一定的参考价值，且与肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期有关，可辅助临床上乳腺癌的早期筛查、诊断及治疗效果评价。

关键词: 乳腺癌, T淋巴细胞, NK细胞, 颗粒酶B, 穿孔素, 分子分型

Abstract:

Objective To analyze the diagnostic value of the expression of Granzyme B and Perforin in peripheral blood T lymphocytes and NK cells in patients with breast cancer （BC）， to investigate the correlation between the expression of granzyme B and perforin and the clinicopathological characteristics of BC， including molecular typing and tumor stage， and the evaluation of the therapeutic effect on BC. Methods Flow cytometry was used to detect the expression of granzyme B and perforin in CD3⁺T cells， CD8⁺T cells and NK cells in 108 patients with BC and 70 benign breast disease controls， and to evaluate the diagnostic efficiency of the receiver operating characteristic （ROC） curve of each indicator in BC； to compare the expression of granzyme B and perforin in patients with different clinicopathological characteristics and the changes of various indicators before and after treatment. Results The expressions of granzyme B and perforin in T lymphocyte subsets and NK cells in BC patients were significantly higher than those of the control group （P < 0.05）. ROC analysis showed that the area under the curve （AUC） of granzyme B and perforin positive rates in CD3⁺T cells， CD8⁺T cells and NK cells was greater than 0.5. The expression of granzyme B and perforin in CD3⁺T cells was positively correlated with the tumor size and clinical stage of BC （P < 0.05）， and granzyme B in CD8⁺T cells was also positively correlated with the tumor size and clinical stage of BC （P < 0.05）. The expression of granzyme B and perforin in CD3⁺T cells in BC patients with lymph node metastasis was significantly greater than that in BC patients without lymph node metastasis （P < 0.05）. The expression of granzyme B and perforin in peripheral blood T lymphocytes in BC patients after treatment was greater than that before treatment （P < 0.05）. Conclusion The expression of granzyme B and perforin in CD3⁺T cells， CD8⁺T cells and NK cells in peripheral blood has certain reference for the diagnosis of BC， and has correlation with tumor size， lymph node metastasis and clinical stage， which can assist in the early screening， diagnosis and treatment evaluation of BC.

Key words: breast cancer, T lymphocytes, NK cells, granzyme B, perforin, molecular typing

中图分类号:

R730.45

庄赵为,袁武梅,任作东,李上飞,陈明贵,曾妍. 乳腺癌患者外周血中颗粒酶B和穿孔素的表达及意义[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(22): 2872-2877.

Zhaowei ZHUANG,Wumei YUAN,Zuodong REN,Shangfei LI,Minggui CHEN,Yan. ZENG. Expression and significance of granzyme B and perforin in peripheral blood of patients with breast cancer[J]. The Journal of Practical Medicine, 2023, 39(22): 2872-2877.

图/表 5

图1

表1

图2

表2

表3

参考文献 20

1	SUNG H， FERLAY J， SIEGEL R L， et al. Global Cancer Statistics 2020： GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries［J］. CA Cancer J Clin， 2021，71（3）：209-249.
2	CAO W， CHEN H D， YU Y W， et al. Changing profiles of cancer burden worldwide and in China： a secondary analysis of the global cancer statistics 2020［J］. Chin Med J （Engl）， 2021，134（7）：783-791.
3	WANG W， ZOU R， QIU Y， et al. Interaction Networks Converging on Immunosuppressive Roles of Granzyme B： Special Niches Within the Tumor Microenvironment［J］. Front Immunol， 2021，12：670324
4	TIBBS E， CAO X. Emerging Canonical and Non-Canonical Roles of Granzyme B in Health and Disease［J］. Cancers （Basel）， 2022，14（6）：1436.
5	HAY Z L Z， SLANSKY J E. Granzymes： The Molecular Executors of Immune-Mediated Cytotoxicity［J］. Int J Mol Sci， 2022， 23（3）：1833.
6	TUOMELA K， AMBROSE A R， DAVIS D M. Escaping Death： How Cancer Cells and Infected Cells Resist Cell-Mediated Cytotoxicity［J］. Front Immunol， 2022，13：867098.
7	HIAM-GALVEZ K J， ALLEN B M， SPITZER M H. Systemic immunity in cancer［J］. Nat Rev Cancer， 2021，21（6）：345-359.
8	KADIN M E， MORGAN J， XU H， et al. Granzyme B Is a Biomarker for Suspicion of Malignant Seromas Around Breast Implants［J］. Aesthet Surg J， 2021，41（12）：1359-1364.
9	翁香琴. 《流式细胞学在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用专家共识（2016年版）》解读［J］. 临床血液学杂志， 2017，30（9）：687-692.
10	YUNUSOVA N V， STAKHEYEVA M N， MOLCHANOV S V， et al. Functional activity of natural killer cells in biological fluids in patients with colorectal and ovarian cancers［J］. Cent Eur J Immunol， 2018，43（1）：26-32.
11	CHUNG J H， YOON S H， JEON D， et al. The feasibility of granzyme B levels using an amperometric immunosensor for lung cancer detection［J］. Ann Transl Med， 2022，10（11）：622.
12	MULDER W M， BLOEMENA E， STUKART M J， et al. T cell receptor-zeta and granzyme B expression in mononuclear cell infifiltrates in normal colon mucosa and colon carcinoma［J］. Gut， 1997， 40： 113-119.
13	LE GOUVELLO S， BASTUJI-GARIN S， ALOULOU N， et al. High prevalence of Foxp3 and IL17 in MMR-profificient colorectal carcinomas［J］. Gut， 2008， 57： 772-779.
14	SALAMA P， PHILLIPS M， PLATELL C， et al. Low expression of Granzyme B in colorectal cancer is associated with signs of early metastastic invasion［J］. Histopathology， 2011，59（2）：207-15.
15	ROUSALOVA I， KREPELA E. Granzyme B-induced apoptosis in cancer cells and its regulation （review）［J］. Int J Oncol， 2010，37（6）：1361-1378.
16	刘海飞，关德凤，许灵波，等. 穿孔素在妇产科疾病中的研究进展［J］. 中国计划生育和妇产科， 2023，15（2）：59-61.
17	KADAM C Y， ABHANG S A. Serum levels of soluble Fas ligand，granzyme B and cytochrome C during adjuvant chemotherapy of breast cancer［J］. Clin Chim Acta， 2015，438：98-102.
18	JAROSCH A， SOMMER U， BOGNER A， et al. Neoadjuvant radiochemotherapy decreases the total amount of tumor infiltrating lymphocytes， but increases the number of CD8+/Granzyme B+ （GrzB） cytotoxic T-cells in rectal cancer［J］. Oncoimmunology， 2017，7（2）：e1393133.
19	朱月华，刘军权，曹卉，等. 放疗联合自身免疫细胞治疗宫颈癌的临床疗效［J］. 中国肿瘤生物杂志， 2012，19（4）：421-427.
20	秦莎莎，潘芝玲，王灿，等. 紫杉醇在肿瘤治疗中对免疫细胞的影响［J］. 宜春学院学报， 2022，44（12）：26-28，57.

指标	临界值（%）	敏感度（%）	特异度（%）	AUC	95%CI	P值
CD3⁺细胞颗粒酶B阳性率	22.380	77.8	61.4	0.729	0.655 ~ 0.803	< 0.001
CD8⁺细胞颗粒酶B阳性率	44.465	71.3	77.1	0.778	0.707 ~ 0.849	< 0.001
NK细胞颗粒酶B阳性率	91.075	54.6	57.1	0.611	0.528 ~ 0.695	0.012
CD3⁺细胞穿孔素阳性率	29.045	66.7	67.1	0.698	0.622 ~ 0.774	< 0.001
CD8⁺细胞穿孔素阳性率	53.670	58.3	84.3	0.754	0.684 ~ 0.825	< 0.001
NK细胞穿孔素阳性率	92.795	67.6	52.9	0.602	0.517 ~ 0.686	0.022

变量		例数	颗粒酶B阳性率（%）			穿孔素阳性率（%）
变量		例数	CD3⁺细胞	CD8⁺细胞	NK细胞	CD3⁺细胞	CD8⁺细胞	NK细胞
HER?2	阴性	42	31.99	54.01	91.58	34.21	53.51	93.62
	阳性	41	30.63	52.57	93.63	35.39	54.93	94.56
Z值			-1.011	-0.829	-0.009	-0.132	-0.328	-0.159
P值			0.312	0.407	0.993	0.895	0.743	0.873
ER	阴性	31	26.46	52.54	93.06	32.88	54.24	94.56
	阳性	52	33.63	53.76	92.00	35.86	54.55	93.62
Z值			-1.092	-0.297	-0.551	-1.045	-0.094	-1.497
P值			0.275	0.767	0.582	0.296	0.925	0.134
PR	阴性	43	28.32	53.41	93.76	33.65	54.80	95.05
	阳性	40	34.59	53.31	91.58	35.55	53.88	93.22
Z值			-0.857	-0.014	-0.333	-0.766	-0.456	-1.221
P值			0.392	0.989	0.739	0.444	0.649	0.222
Ki?67	低表达	20	34.19	55.12	93.09	34.40	54.87	94.59
	高表达	63	29.38	52.28	92.84	34.64	54.34	93.28
Z值			-0.655	-0.905	-0.426	-0.282	-0.788	-0.453
P值			0.513	0.365	0.670	0.778	0.431	0.651
肿瘤大小	≤ 2 cm	33	24.90	48.46	93.86	30.24	54.36	95.58
	2 ~ 5 cm	45	35.89	55.38	92.32	36.51	54.93	93.82
	> 5 cm	5	35.28	57.98	86.88	39.54	51.20	87.10
H值			11.583	6.598	4.701	7.558	2.105	7.558
P值			0.003	0.037	0.095	0.023	0.349	0.133
淋巴结转移	否	38	26.24	50.21	93.79	33.21	54.87	95.37
淋巴结转移	是	45	35.89	55.38	91.60	36.94	54.34	93.79
Z值			-2.646	-1.659	-0.713	-2.322	-0.484	-1.531
P值			0.008	0.097	0.476	0.020	0.628	0.126
TNM分期	Ⅰ	23	23.29	48.46	93.82	30.05	55.85	94.56
	Ⅱ	39	34.03	52.57	93.63	34.64	54.02	95.05
	Ⅲ-Ⅳ	21	35.70	59.31	91.43	36.51	54.80	92.86
H值			7.223	6.321	0.862	6.819	1.769	2.818
P值			0.027	0.042	0.650	0.033	0.413	0.244
分子分型	Luminal A型	9	37.36	56.57	91.01	38.87	50.97	87.10
	Luminal B型	34	30.24	49.38	90.48	34.55	54.65	92.94
	HER?2型	28	27.42	53.92	93.81	35.33	54.87	95.10
	三阴型	12	28.81	55.28	94.20	32.29	54.94	96.55
H值			3.622	3.356	3.085	3.318	2.333	4.880
P值			0.305	0.340	0.379	0.345	0.506	0.181

项目	例数	颗粒酶B阳性率（%）			穿孔素阳性率（%）
项目	例数	CD3⁺细胞	CD8⁺细胞	NK细胞	CD3⁺细胞	CD8⁺细胞	NK细胞
治疗前	22	25.10	42.05	91.25	24.45	46.06	94.10
治疗后	102	32.14	54.98	91.26	35.36	56.22	93.44
Z值		-2.580	-3.411	-0.448	-2.996	-2.744	-0.739
P值		0.010	0.001	0.654	0.003	0.006	0.460

[1]	宋子旭,朱光正,郭晨旭,武佳琪,张立功,钱军. SLC35A2、前叶黄素亚基2在乳腺癌中的表达及其与临床观察指标和预后的关系[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(4): 496-502.
[2]	陈曦,王欢,李小龙,沈丽,刘洪涛,王碧薇,赵宏微. NK细胞联合Treg细胞对慢性粒细胞白血病患者酪氨酸激酶抑制剂停药的预测价值[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(20): 2900-2904.
[3]	李鑫盼,方懿,邱俊. CD3⁺/CD4⁺T淋巴细胞水平及中性粒细胞与淋巴细胞比值在放射性肺炎中的预测价值[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(20): 2923-2928.
[4]	曾颖华,李文姬,郑莉. 经外周置入中心静脉导管后首次换药时间对乳腺癌术后患者的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(19): 2772-2777.
[5]	詹银周,陈俊衡,陈超,蔡楚源,马学珠,郭春明. 伤害感受水平指数指导瑞芬太尼输注靶浓度对接受乳腺癌根治术患者细胞免疫和缺氧诱导因子-1α的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(18): 2566-2570.
[6]	陈车,罗德红,喻皇飞,张琴,胡小池,余盛华,李亚军. 自动勾画技术在全乳内侧瘤床同步推量中的应用[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(17): 2406-2411.
[7]	李劭晋,郑世鹏. 术前影像病理特征及肿瘤标志物预测乳腺癌前哨淋巴结转移风险[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(17): 2418-2424.
[8]	方玲玉,胡璟骅,文俊峰,韩诗琪,王雅丽,蒲卢兰,李静佳,杨懿,邓世山,侯令密,周方方. 泛素特异性蛋白酶20、低氧诱导因子1α在乳腺癌中的表达变化及意义[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(16): 2270-2276.
[9]	艾勇彪黄军袁杰李文仿 . 早期三阴性乳腺癌中雄激素受体表达与临床病理特征及预后的关系 [J]. 实用医学杂志, 2023, 39(8): 975-979.
[10]	袁柳青梁伟东李晓玲邓六香钟茂林 . 耳穴压豆联合经皮穴电刺激预防乳腺癌术后恶心呕吐的效果 [J]. 实用医学杂志, 2023, 39(5): 642-646.
[11]	刘君晗关凤军程巾庄亚飞石梦月袁文君陆书文 . 激素敏感型肾病综合征患儿记忆T淋巴细胞亚群精细分型的临床意义 [J]. 实用医学杂志, 2023, 39(4): 436-441.
[12]	石夕冉,王恒,何力兵,邱志强,李泓箭,徐晓雪. 多模态磁共振预测乳腺癌淋巴结转移状态的研究进展[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(22): 2861-2865.
[13]	车雅丹,李丽霞. 小分子抗血管生成药物在晚期乳腺癌中的研究进展[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(22): 2866-2871.
[14]	刘海英,陈峰,姚嘉. 下调胰岛素样生长因子抑制miR-767-5p的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的影响[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(22): 2878-2884.
[15]	张正花,龚荣府,方文. 敲除成纤维细胞生长因子2基因抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移侵袭并促进细胞凋亡[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(22): 2885-2890.