实用医学杂志 ›› 2022, Vol. 38 ›› Issue (1): 38-44.doi: 10.3969/j.issn.1006⁃5725.2022.01.008
细胞自噬调控上皮间质转化在肺纤维化中的作用机制
胡琴1，2，3 张晨曦4 柯少瑞1，2，3
河南中医药大学1 呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心，2 河南省中医药防治呼吸病重点实验室， 3 中医药科学院，4 药学院（郑州 450046）
Mechanism of autophagy regulating epithelial mesenchymal transformation in pulmonary fibrosis
HU Qin*，ZHANG Chenxi，KE Shaorui.
Co ⁃construction Collaborative Innovation Center for Chinese Medicine and Respiratory Diseases by He′nan & Education Ministry of P.R.，He′nan University of Chinese Medicine，Zhengzhou 450046，China；*He′nan Key Laboratory of Chinese Medicine for Respiratory Disease，He′nan University of Chinese Medicine，Zhengzhou 450046，China；*Academy of Chinese Medicine Sciences，He′nan University of Chinese Medi⁃ cine，Zhengzhou 450046，China
摘要：
目的 探讨细胞自噬在特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）中的作用机制及 其变化对调控肺泡上皮间质转化（epithelial⁃mesenchymal transition，EMT）的影响，为进一步阐明IPF 的发病 机制提供实验依据。方法 采用倒置显微镜观察不同浓度转化生长因子（transforming growth factor⁃β， TGF⁃β1）作用于人源肺泡上皮细胞 A549 后其形态学改变；CCK⁃8 法检测不同浓度 TGF⁃β1 对 A549 细胞活 力的影响；Western blot 检测不同浓度 TGF⁃β1 对自噬和 EMT 相关蛋白表达的影响，筛选出最佳的诱导浓度 及时间，建立纤维化体外模型；透射电子显微镜（TEM）观察 5 ng/mL TGF⁃β1 对 A549 细胞自噬的影响；造模成功后，将A549细胞分为空白组（Control）、模型组（5 ng/mL TGF⁃β1）、RAPA组（10 nmol/L RAPA）、TGF⁃β1 + RAPA（5 ng/mL TGF⁃β1+10 nmol/L RAPA）组，Western blot 和免疫荧光法检测加入自噬激动剂雷帕霉素 （rapamycin，RAPA）后，自噬和 EMT 相关蛋白的表达变化。结果 与对照组相比，TGF⁃β1 处理后细胞形态 由不规则多边形转变为梭形且细胞分散开来，呈现出 EMT 的典型表象。CCK⁃8 结果显示，在实验浓度范 围内，TGF⁃β1 对 A549 细胞无明显的细胞毒性作用（P > 0.05）。Western blot 结果显示，与对照组相比，经 TGF⁃β1 浓度梯度诱导的各组 Beclin1、E⁃cadherin 的蛋白表达下调，p62、N⁃cadherin 的蛋白表达上调（P < 0.05）。TEM 结果显示，与对照组相比，TGF⁃β1 诱导后细胞形态向梭形转变，且自噬溶酶体数量显著减少。 加入 RAPA 之后，Western blot 和免疫荧光结果显示，与模型组相比，RAPA 组 Beclin1、E⁃cadherin、LC3 蛋白 表达上调，p62、N⁃cadherin、Fibronectin 蛋白表达下调（P < 0.05）。结论 TGF⁃β1 可下调 A549 细胞自噬水 平，促进细胞EMT 发生，RAPA 在提高自噬水平的同时可抑制EMT 从而缓解肺纤维化
