亚精胺对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株增殖和凋亡的影响

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2024.22.003

摘要/Abstract

摘要：

目的探究亚精胺（spermidine）对弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞株增殖和凋亡的影响。方法 CCK-8法检测亚精胺对DLBCL细胞株生长的影响；流式细胞术检测亚精胺对 DLBCL细胞株增殖和细胞周期的影响，并检测亚精胺对 DLBCL 细胞株、小鼠脾脏细胞及健康人外周血单个核细胞（PBMCs）凋亡的影响；Western blot检测亚精胺作用后DLBCL细胞株中细胞周期和凋亡相关蛋白表达的变化。结果 CCK-8检测结果显示亚精胺显著抑制DLBCL细胞株的生长（P < 0.001）；流式染色检测结果表明亚精胺不影响DLBCL细胞株的增殖及细胞周期，但显著促进DLBCL细胞株的凋亡（P < 0.001），亚精胺促进小鼠脾脏细胞凋亡（P < 0.01），但该效应显著弱于其对DLBCL细胞株的促凋亡效应（P < 0.001），亚精胺对PBMCs无显著促凋亡作用；Western blot结果表明亚精胺不影响DLBCL细胞株细胞周期蛋白CDK2和CDK4的表达水平，但促进A20细胞Caspase-9以及OCI-Ly3细胞Caspase-8的激活。结论亚精胺通过促进细胞凋亡进而抑制DLBCL细胞株的生长，而其对鼠脾脏细胞以及健康人PBMCs发挥的促凋亡效应较弱甚至无促凋亡作用，提示亚精胺可能具备在体内特异性地抑制DLBCL细胞株生长的潜力。

关键词: 亚精胺, 弥漫大 B 细胞淋巴瘤, 增殖, 凋亡

Abstract:

Objective To investigate the impact of spermidine on proliferation and apoptosis of diffuse large B?cell lymphoma （DLBCL） cell lines. Methods The impact of spermidine on cellular growth was assessed using a CCK?8 assay. Flow cytometry was employed to investigate the effects of spermidine on the proliferation and cell cycle dynamics of DLBCL cell lines， as well as to evaluate its influence on apoptosis in DLBCL cell lines， mouse splenocytes， and peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） derived from healthy individuals. Western blot analysis was conducted to examine alterations in protein expression levels associated with apoptosis and the cell cycle following treatment with spermidine. Results The CCK?8 assay revealed a significant inhibitory effect of spermidine on DLBCL cell growth （P < 0.001）. Flow cytometric analysis demonstrated that spermidine had no impact on the proliferation or cell cycle of DLBCL cells， but significantly induced apoptosis （P < 0.001）. Spermidine exhibited a pro?apoptotic effect on mouse splenocytes （P < 0.01）， albeit weaker compared to its effect on DLBCL cells （P < 0.001）， and showed no significant pro?apoptotic effect on PBMCs. Western blot results indicated that spermidine did not influence the expression levels of cell cycle proteins CDK2 and CDK4， but enhanced the activation of Caspase?9 in A20 cells and Caspase?8 in OCI?Ly3 cells. Conclusion Spermidine induces apoptosis and suppresses cell growth in DLBCL cell lines， while exhibiting diminished or absent pro-apoptotic effects on mouse splenocytes and healthy human PBMCs， suggesting its potential as a specific inhibitor for the growth of DLBCL cell lines in vivo.

Key words: spermidine, diffuse large B-cell lymphoma, proliferation, apoptosis

中图分类号:

R733.4

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图/表 14

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组别	24 h OD值（450 nm）	48 h OD值（450 nm）
Control组	0.254 ± 0.004	0.409 ± 0.012
2.5 μmol/L Spermidine组	0.251 ± 0.008^**	0.290 ± 0.024^##***
5 μmol/L Spermidine组	0.237 ± 0.006^#	0.246 ± 0.004^##*
10 μmol/L Spermidine组	0.233 ± 0.006^##	0.224 ± 0.003^##
F值	17.22	190.0
P值	< 0.000 1	< 0.000 1

组别	24 h OD值（450 nm）	48 h OD值（450 nm）
Control组	0.366 ± 0.015	0.724 ± 0.103
2.5 μmol/L Spermidine组	0.332 ± 0.013^#**	0.593 ± 0.127^**
5 μmol/L Spermidine组	0.306 ± 0.016^###**	0.482 ± 0.044^##*
10 μmol/L Spermidine组	0.248 ± 0.014^###	0.271 ± 0.003^###
F值	53.04	25.74
P值	< 0.000 1	< 0.000 1

组别	A20（48 h）		OCI?Ly3（48 h）
组别	Ki67/%	Ki67（MFI）	Ki67/%	Ki67（MFI）
Control组	92.274 ± 0.646	40 591.600 ± 1 246.350	94.050 ± 0.545	48 532.250 ± 4 864.604
10 μmol/L Spermidine组	92.570 ± 0.130	42 887.800 ± 1 753.880	94.262 ± 0.633	52 863.400 ± 3 002.796
t值	1.004	2.386	1.495	0.144
P值	0.345	0.044	0.613	0.143

组别	A20（48 h）			OCI-Ly3（48 h）
组别	G₀/G₁	S	G₂/M	G₀/G₁	S	G₂/M
Control组	60.378 ± 3.048	34.152 ± 1.581	1.872 ± 1.339	66.234 ± 3.087	22.088 ± 2.066	10.554 ± 0.917
10 μmol/L Spermidine组	57.884 ± 2.234	33.808 ± 1.836	3.504 ± 0.867	62.994 ± 3.504	24.594 ± 2.211	11.284 ± 2.418
t值	1.476	0.318	2.287	1.551	1.851	0.631
P值	0.179	0.759	0.052	0.159	0.101	0.546

组别	A20（48 h）		OCI?Ly3（48 h）
组别	CDK2	CDK4	CDK2	CDK4
Control组	1.242 ± 0.432	1.583 ± 0.324	1.301 ± 0.350	1.409 ± 0.414
10 μmol/L Spermidine组	1.178 ± 0.323	1.381 ± 0.269	1.283 ± 0.341	1.560 ± 0.373
t值	0.206	0.827	0.063	0.468
P值	0.847	0.455	0.953	0.665