丹参酮ⅡA调节Fas/FasL信号通路对脂多糖诱导的牙髓干细胞增殖和凋亡的影响

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2023.24.006

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨丹参酮ⅡA（Tan ⅡA）调节脂肪酸合成酶（Fas）/脂肪酸合成酶配体（FasL）通路对脂多糖（LPS）诱导的牙髓干细胞增殖和凋亡的影响。方法鉴定从需正畸的18 ~ 20岁患者第三磨牙中分离的人牙髓干细胞（hDPSCs）。用低、中、高剂量Tan ⅡA处理LPS诱导的hDPSCs后，再用人重组FasL蛋白（rh FasL）干预高剂量Tan ⅡA作用后的LPS诱导的hDPSCs，检测hDPSCs增殖、凋亡、hDPSCs上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6水平及hDPSCs中增殖细胞核抗原（PCNA）、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、Fas、FasL蛋白表达。结果成功分离出hDPSCs。Tan ⅡA可促进LPS诱导的牙髓干细胞增殖，抑制凋亡，上调PCNA蛋白表达，抑制TNF-α、IL-6水平及Cleaved Caspase-3、Fas、FasL蛋白表达，且呈剂量依赖性，rh FasL对LPS诱导的牙髓干细胞的影响与上述对应指标变化趋势相反（P < 0.05）；rh FasL减弱了高剂量Tan ⅡA对LPS诱导的牙髓干细胞增殖的促进以及对细胞凋亡的抑制作用。结论 Tan ⅡA可能通过抑制Fas/FasL信号通路促进LPS诱导的hDPSCs增殖，抑制凋亡。

关键词: 丹参酮ⅡA, 脂肪酸合成酶/脂肪酸合成酶配体信号通路, 牙髓干细胞, 增殖, 凋亡

Abstract:

Objective To investigate the impacts of tanshinone ⅡA （Tan ⅡA） on lipopolysaccharide （LPS） induced proliferation and apoptosis of dental pulp stem cells by regulating the fatty acid synthase （Fas）/fatty acid synthase ligand （FasL） signaling pathway. Methods Identification of human pulp stem cells （hDPSCs） isolated from the third molar of 18 ~ 20 years old patients requiring orthodontics. Lps-induced hDPSCs were treated with low， medium and high doses of Tan ⅡA， and then human recombinant FasL protein （rh FasL） was used to intervene the LPS-induced hDPSCs after high dose Tan ⅡA. Proliferation and apoptosis of hDPSCs， levels of tumor necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin （IL）-6 in hDPSCs supernatant， proliferating cell nuclear antigen （PCNA）， Cleaved aspartate-specific cysteine proteinase-3 （Cleaved Caspase-3）， Fas， FasL protein expression were detected. Results hDPSCs were successfully isolated. In a dose-dependent manner， Tan IIA promoted LPS-induced proliferation， inhibited apoptosis， up-regulated PCNA protein expression， and inhibited TNF-α， IL-6 level， Cleaved Caspase-3， Fas， and FasL protein expression. The effect of rh FasL on LPS-induced dental pulp stem cells was opposite to the above indexes （P < 0.05）. rh FasL attenuates the effect of high-dose Tan ⅡA on proliferation and apoptosis of LPS-induced dental pulp stem cells. Conclusion Tan ⅡA may promote LPS induced hDPSCs proliferation and inhibit apoptosis by inhibiting the Fas/FasL signaling pathway.

Key words: tanshinone ⅡA, fatty acid synthase/fatty acid synthase ligand signaling pathway, dental pulp stem cells, proliferation, apoptosis

中图分类号:

R285

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图/表 9

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参考文献 26

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分组	OD₄₅₀值	EdU阳性细胞率（%）
对照组	1.03 ± 0.11	58.86 ± 2.74
LPS组	0.36 ± 0.03^*	13.44 ± 0.57^*
Tan ⅡA低剂量组	0.48 ± 0.03^#	21.15 ± 0.98^#
Tan ⅡA中剂量组	0.61 ± 0.05^#&	28.87 ± 1.33^#&
Tan ⅡA高剂量组	0.86 ± 0.07^#&@	42.25 ± 2.33^#&@
rh FasL组	0.21 ± 0.01^#	7.68 ± 0.28^#
Tan ⅡA高剂量+rh FasL组	0.55 ± 0.04^Δ	25.67 ± 1.15^Δ
F值	145.400	737.700
P值	< 0.001	< 0.001

分组	凋亡率（%）
对照组	8.24 ± 0.39
LPS组	43.32 ± 2.31^*
Tan ⅡA低剂量组	35.29 ± 1.86^#
Tan ⅡA中剂量组	28.57 ± 1.64^#&
Tan ⅡA高剂量组	19.64 ± 0.84^#&@
rh FasL组	51.52 ± 2.15^#
Tan ⅡA高剂量+rh FasL组	31.74 ± 1.43^Δ
F值	458.300
P值	<0.001

分组	TNF-α（pg/mL）	IL-6（pg/mL）
对照组	17.65 ± 0.64	64.45 ± 2.79
LPS组	137.78 ± 5.88^*	312.25 ± 15.52^*
Tan ⅡA低剂量组	119.94 ± 4.72^#	278.83 ± 12.26^#
Tan ⅡA中剂量组	89.24 ± 3.68^#&	221.76 ± 9.54^#&
Tan ⅡA高剂量组	37.74 ± 1.55^#&@	114.45 ± 5.36^#&@
rh FasL组	156.67 ± 7.34^#	365.58 ± 14.43^#
Tan ⅡA高剂量+rh FasL组	92.55 ± 4.31^Δ	251.52 ± 12.28^Δ
F值	746.400	548.900
P值	< 0.001	< 0.001

分组	PCNA/GAPDH	Cleaved Caspase-3/GAPDH	Fas/GAPDH	FasL/GAPDH
对照组	1.57 ± 0.12	0.41 ± 0.03	0.32 ± 0.03	0.27 ± 0.02
LPS组	0.36 ± 0.02^*	1.52 ± 0.16^*	1.12 ± 0.11^*	0.94 ± 0.08^*
Tan ⅡA低剂量组	0.51 ± 0.04^#	1.31 ± 0.12^#	0.95 ± 0.08^#	0.81 ± 0.08^#
Tan ⅡA中剂量组	0.86 ± 0.08^#&	1.05 ± 0.09^#&	0.71 ± 0.06^#&	0.64 ± 0.05^#&
Tan ⅡA高剂量组	1.12 ± 0.09^#&@	0.72 ± 0.06^#&@	0.46 ± 0.03^#&@	0.38 ± 0.03^#&@
rh FasL组	0.19 ± 0.01^#	1.83 ± 0.14^#	1.39 ± 0.12^#	1.23 ± 0.11^#
Tan ⅡA高剂量+rh FasL组	0.64 ± 0.05^Δ	1.12 ± 0.09^Δ	0.84 ± 0.07^Δ	0.70 ± 0.06^Δ
F值	283.500	119.200	133.400	138.900
P值	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

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