LncRNA FAM83A-AS1通过miR-150/HMGA2轴对视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2023.22.013

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）序列相似家族83成员A-反义核糖核酸1（FAM83A-AS1）在视网膜母细胞瘤（RB）细胞中的作用及其潜在的分子机制。方法体外培养RB细胞，将Vector、pcDNA-FAM83A-AS1、NC-siRNA、FAM83A-AS1-siRNA分别转染至细胞中（依次为pcDNA?FAm83A?AS1组、NC-siRNA组、FAm83A-AS1-siRNA组），检测RB细胞中FAM83A-AS1的表达、RB细胞增殖能力、凋亡率。生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验预测和验证FAM83A-AS1与miR-150以及miR-150与高迁移率族蛋白A2（HMGA2）的靶向关系。RT-qPCR检测RB细胞中miR-150、HMGA2 mRNA的表达；Western blot检测RB细胞中HMGA2蛋白的表达；MTT实验和流式细胞术检测转染后RB细胞增殖和凋亡能力。结果 pcDNA-FAM83A-AS1组细胞中FAM83A-AS1的表达显著高于Vector组，低于NC-siRNA组（P < 0.05）。pcDNA-FAM83A-AS1组较Vector组的细胞增殖能力显著升高，细胞凋亡率显著降低（P < 0.05）。FAM83A-AS1-siRNA组较NC-siRNA组的细胞增殖能力显著降低，细胞凋亡率显著升高（P < 0.05）。miR-150 mimic可显著抑制RB细胞增殖能力，促进细胞凋亡。而pcDNA-HMGA2可显著逆转miR-150 mimic对RB细胞增殖和凋亡的作用。结论敲低lncRNA FAM83A-AS1通过调控miR-150/HMGA2轴抑制RB细胞增殖，促进细胞凋亡。

关键词: lncRNA FAM83A-AS1, 视网膜母细胞瘤, 微小RNA -150, 增殖, 凋亡

Abstract:

Objective To investigate the role of long non-coding RNA family with sequence similarity 83 member A antisense RNA 1 in retinoblastoma （RB） cells and its potential molecular mechanism. Methods RB cells were cultured in vitro， and Vector， pcDNA-FAM83A-AS1， NC-siRNA， and FAM83A-AS1-siRNA were transfected into cells to detect the expression of FAM83A-AS1， RB cell proliferation ability， and apoptosis rate in RB cells. Bioinformatics and dual-luciferase reporter gene experiments were performed to predict and verify the targeting relationship between FAM83A-AS1 and miR-150， and miR-150 and the high-mobility family protein A2 （HMGA 2）. The expression of miR-150 and HMGA2 mRNA in RB cells was measured by RT-qPCR； HMGA 2 protein in RB cells by Western blot； and the proliferation and apoptotic capacity of RB cells after transfection by MTT assay and flow cytometry. Results The expression of FAM83A-AS1 in the pcDNA-FAM83A-AS1 group was significantly higher than that of the Vector group and lower than that of the NC-siRNA group （P < 0.05）. The cell proliferation capacity in the pcDNA-FAM83A-AS1 group was significantly higher， and the apoptosis rate was significantly lower （P < 0.05）. Compared with NC-siRNA group， FAM83A-AS1-siRNA group showed significantly increased apoptosis rate （P < 0.05）. The miR-150 mimic significantly inhibited the proliferation capacity of RB cells and promoted cell apoptosis. However， pcDNA-HMGA 2 significantly reversed the effect of miR-150 mimic on the proliferation and apoptosis of RB cells. Conclusion Knockdown of lncRNA FAM83A-AS1 inhibited RB cell proliferation and promoted apoptosis by regulating the miR-150/HMGA2 axis.

Key words: lncRNA FAM83A-AS1, retinoblastoma, miR-150, proliferation, apoptosis

中图分类号:

R739.7

周小平,彭正武,陈书扬,刘茹,田涛,欧玉仑. LncRNA FAM83A-AS1通过miR-150/HMGA2轴对视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(22): 2934-2940.

Xiaoping ZHOU,Zhengwu PENG,Shuyang CHEN,Ru LIU,Tao TIAN,Yulun. OU. Effect of lncRNA FAM83A-AS1 on proliferation and apoptosis of retinoblastoma cells through miR-150/HMGA2 axis[J]. The Journal of Practical Medicine, 2023, 39(22): 2934-2940.

图/表 6

图1

表1

图2

表2

图3

表3

参考文献 26

1	GUPTA H， MALAICHAMY S， MALLIPATNA A， et al. Retinoblastoma genetics screening and clinical management［J］.BMC Med Genomics， 2021， 14（1）：188.
2	SCHAIQUEVICH P， FRANCIS J H， CANCELA M B， et al. Treatment of retinoblastoma： What is the latest and what is the future［J］.Front Oncol， 2022， 12：822330.
3	KOPP F， MENDELL J T. Functional classification and experimental dissection of long noncoding RNAs［J］.Cell， 2018， 172（3）：393-407.
4	TANIUE K， AKIMITSU N. The functions and unique features of LncRNAs in cancer development and tumorigenesis［J］. Int J Mol Sci， 2021， 22（2）：632.
5	ZHANG A， SHANG W， NIE Q， et al. Long non-coding RNA H19 suppresses retinoblastoma progression via counteracting miR-17-92 cluster［J］. J Cell Biochem， 2018， 119（4）：3497-3509.
6	HAN N， ZUO L， CHEN H， et al. Long non-coding RNA homeobox A11 antisense RNA （HOXA11-AS） promotes retinoblastoma progression via sponging miR-506-3p［J］. Onco Targets Ther， 2019， 12：3509-3517.
7	WANG W， ZHAO Z， XU C， et al. LncRNA FAM83A-AS1 promotes lung adenocarcinoma progression by enhancing the pre-mRNA stability of FAM83A［J］. Thorac Cancer， 2021， 12（10）：1495-1502.
8	XIAO G， WANG P， ZHENG X， et al. FAM83A-AS1 promotes lung adenocarcinoma cell migration and invasion by targeting miR-150-5p and modifying MMP14［J］. Cell Cycle， 2019， 18（21）：2972-2985.
9	LIN W， ZHOU Q， WANG C Q， et al. LncRNAs regulate metabolism in cancer［J］. Int J Biol Sci， 2020， 16（7）：1194-1206.
10	DINESCU S， IGNAT S， LAZAR A D， et al. Epitranscriptomic signatures in lncRNAs and their possible roles in cancer［J］. Genes （Basel）， 2019， 10（1）：52.
11	HUANG G M， ZANG H L， GENG Y X， et al. LncRNA FAM83A-AS1 aggravates the malignant development of esophageal cancer by binding to miR-495-3p［J］. Eur Rev Med Pharmacol Sci， 2020， 24（18）：9408-9415.
12	WU J， QIAN D， SUN X. Long noncoding RNAs as potential biomarkers in retinoblastoma： a systematic review and meta-analysis［J］. Cancer Cell Int，2020，20：201.
13	FENG W， ZHU R， MA J， et al. LncRNA ELFN1-AS1 promotes retinoblastoma growth and invasion via regulating miR-4270/SBK1 axis［J］. Cancer Manag Res， 2021， 13：1067-1073.
14	HE H， QIN M. Long non-coding RNA LEF1-AS1 is involved in the progression of retinoblastoma through regulating the Wnt/β-catenin pathway［J］. Clin Exp Pharmacol Physiol， 2020， 47（5）：886-891.
15	CHEN Z， HU Z， SUI Q， et al. LncRNA FAM83A-AS1 facilitates tumor proliferation and the migration via the HIF-1α/ glycolysis axis in lung adenocarcinoma［J］. Int J Biol Sci，2022，18（2）：522-535.
16	ZHAO H， WANG Y， WU X， et al. FAM83A antisense RNA 1 （FAM83A-AS1） silencing impairs cell proliferation and induces autophagy via MET-AMPKɑ signaling in lung adenocarcinoma［J］. Bioengineered，2022，13（5）：13312-13327.
17	朱岱阳，杜洋，范培芝. lncRNAs在甲状腺癌中的研究进展［J］. 实用医学杂志，2020，36（8）：1116-1120.
18	LUO H， XU C， LE W， et al. lncRNA CASC11 promotes cancer cell proliferation in bladder cancer through miRNA-150［J］. J Cell Biochem， 2019， 120（8）：13487-13493.
19	ZHAO Y， YUAN D， ZHU D， et al. LncRNA-MSC-AS1 inhibits the ovarian cancer progression by targeting miR-425-5p［J］. J Ovarian Res， 2021， 14（1）：109.
20	HUANG G M， ZANG H L， GENG Y X， et al. LncRNA FAM83A-AS1 aggravates the malignant development of esophageal cancer by binding to miR-495-3p［J］. Eur Rev Med Pharmacol Sci， 2020， 24（18）：9408-9415.
21	HUANG H， YANG C， ZHANG Q， et al. Long non-coding RNA FAM83A antisense RNA 1 （lncRNA FAM83A-AS1） targets microRNA-141-3p to regulate lung adenocarcinoma cell proliferation， migration， invasion， and epithelial-mesenchymal transition progression［J］. Bioengineered， 2022， 13（3）：4964-4977.
22	SONG J， SUN Y， CAO H， et al. A novel pyroptosis-related lncRNA signature for prognostic prediction in patients with lung adenocarcinoma［J］. Bioengineered，2021，12（1）：5932-5949.
23	KONAR G J， FERGUSON C， FLICKINGER Z， et al. miRNAs and Müller Glia Reprogramming During Retina Regeneration［J］. Front Cell Dev Biol， 2021，8：632632.
24	FAN H， LIU X， ZHENG W W， et al. MiR-150 alleviates EMT and cell invasion of colorectal cancer through targeting Gli1［J］. Eur Rev Med Pharmacol Sci， 2020， 24（14）：7544.
25	LI Z， ZHOU X， HUANG J， et al. miR-150-5p inhibits nasopharyngeal cancer genesis by suppressing PYCR1［J］. Am J Med Sci， 2022， S0002-9629（22）00268-3.
26	LI W， WANG J， ZHANG D， et al. MicroRNA-98 targets HMGA2 to inhibit the development of retinoblastoma through mediating Wnt/β-catenin pathway［J］. Cancer Biomark， 2019， 25（1）：79-88.

组别	例数	FAM83A-AS1	细胞增生值（A）	凋亡率（%）
Vector组	3	1.00 ± 0.08	0.58 ± 0.05	12.53 ± 1.14
pcDNA-FAM83A-AS1组	3	3.11 ± 0.29^a	0.87 ± 0.07^a	6.04 ± 0.52^a
NC-siRNA组	3	0.98 ± 0.09	0.61 ± 0.04	11.28 ± 1.37
FAM83A-AS1-siRNA组	3	0.45 ± 0.04^b	0.29 ± 0.03^b	26.15 ± 2.08^b
F值		166.151	68.232	113.487
P值		< 0.05	< 0.05	< 0.05

组别	例数	miR-150	细胞增生值（A）	凋亡率（%）
NC-siRNA组	3	1.00 ± 0.08	0.66 ± 0.06	9.06 ± 0.61
FAM83A-AS1-siRNA组	3	3.06 ± 0.26^a	0.29 ± 0.03^a	21.43 ± 1.82^a
FAM83A-AS1-siRNA+NC inhibitor组	3	3.14 ± 0.33	0.32 ± 0.04	20.11 ± 1.63
FAM83A-AS1-siRNA+miR-150 inhibitor组	3	1.58 ± 0.14^b	0.51 ± 0.05^b	11.56 ± 0.96^b
F值		44.689	27.501	62.457
P值		< 0.05	< 0.05	< 0.05

组别	例数	HMGA2 mRNA	HMGA2蛋白	细胞增生值（A）	凋亡率（%）
NC mimic组	3	1.00 ± 0.09	0.61 ± 0.08	0.71 ± 0.07	8.12 ± 0.53
miR-150 mimic组	3	0.37 ± 0.04^a	0.28 ± 0.03^a	0.34 ± 0.03^a	18.47 ± 1.24^a
miR-150 mimic+Vector组	3	0.39 ± 0.03	0.29 ± 0.06	0.36 ± 0.05	19.35 ± 1.36
miR-150 mimic+pcDNA-HMGA2组	3	0.88 ± 0.08^b	0.51 ± 0.05^b	0.59 ± 0.08^b	11.56 ± 0.71^b
F值		49.566	15.803	17.392	55.724
P值		< 0.05	< 0.05	< 0.05	< 0.05

[1]	罗珊,冯莹,范丹丹,郑雯鑫,郭兴荣,阮绪芝. 血管生成素样蛋白8敲除减轻脂多糖诱导的肝脏脂质沉积[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(9): 1197-1203.
[2]	何伟,刘丽萍,卓静薇,张小冬,杨通,冯巨滨. 拮抗CC趋化因子受体5信号诱导肿瘤细胞凋亡并调节肿瘤微环境抑制肿瘤生长[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(9): 1204-1210.
[3]	刘景,冷春涛,王艳. circRNA SIPA1L1修饰牙髓干细胞来源外泌体促血管生成能力的机制[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(9): 1211-1217.
[4]	李文昕,卢敏君,林莉,刘月琴,朱小兰. circRAF1调节人卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(7): 910-917.
[5]	杨贞,江少如,陈小燕,陈晓琳,邓伟民,郭新宇. 经后增殖方对控制性超促排卵大鼠卵巢GDF9分泌及颗粒细胞凋亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(7): 918-923.
[6]	赵敏,倪平,翟惠莹,靳小可,杨玉琼. 淋巴样增强结合因子1在B细胞慢性淋巴增殖性疾病中的表达[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(7): 984-988.
[7]	徐俐,胡珊珊,赵海明. LncRNA GNAS-AS1通过调节miR-449a/Notch1轴参与胃癌细胞的增殖和迁移[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(4): 483-489.
[8]	马润伟,穆纯杰,桂雯婷,邓瑶,赵敏章,柳民,宋怡. LncRNA SENCR靶向miR⁃206调控人主动脉夹层血管平滑肌细胞增殖和凋亡[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(3): 302-308.
[9]	丁丽宏,耿世佳,王玉杰. 蟛蜞菊内酯对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子分泌的调节作用[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(3): 316-320.
[10]	吴冰儿,李清,杨可容,张健,余逸,雷蕾,胡博. 亚精胺对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株增殖和凋亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(22): 3130-3137.
[11]	罗青,黄金金,任婷婷,周瑞华,徐栋花,王振华,王国颖. 人脐带干细胞外泌体对人毛乳头细胞增殖的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(20): 2828-2834.
[12]	张春梅,黄新惠,胡锦秋,毕晓艳,牙甫礼. 莱菔硫烷下调PI3K/Akt信号通路对高糖诱导人血小板凋亡的保护作用[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(18): 2530-2536.
[13]	吕饶,于佳迪,李柳蓁,湛楚蓝,赵立越,李月亮,董珺,黎佼. 年轻干细胞抗原-1阳性骨髓干细胞调控年老小鼠心脏成纤维细胞凋亡的分子机制[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(17): 2369-2374.
[14]	王发辉,邓青春,林佳佳,陈春妃. GATA3介导miR-21/PTEN轴对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(15): 2069-2074.
[15]	张琼,何素丽. miR-23a和APAF-1在子宫内膜癌中的表达及意义[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(15): 2116-2120.