目的 探讨经大鼠的气道注入 1 型腺相关病毒(AAV1)携带的 KLF4⁃shRNA 能否有效构建肺 血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用。方法 根据大鼠 KLF4 基因序列,设计针对大鼠 特异性的 siRNA 序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然后进一步构建 AAV1⁃KLF4⁃shRNA 腺相 关病毒载体。将 44 只清洁级 SD 大鼠随机分为 4 组:健康对照组、盐水模型组、对照病毒载体组、基因敲减组。后 3 组大鼠分别气管内注入生理盐水(盐水模型组)、AAV1⁃control vector(对照病毒载体组)、AAV1⁃ KLF4⁃shRNA(基因敲减组)。1 个月后对后 3 组进行烟熏造模,烟熏 4 个月后麻醉各组大鼠,分别检测右心 室收缩压和平均右心室压,并取肺组织以免疫荧光法观察病毒载体在肺血管中的表达情况,通过 PCR 方 法测定肺动脉中 KLF4 水平,通过 HE 染色比较肺小血管中膜厚度评估肺血管肥厚程度。取大鼠心脏计算 右心肥厚指数。结果 细胞计数和细胞迁移实验证实选用的 KLF4⁃siRNA 链有效。免疫荧光实验显示, 经大鼠气道注入的1型腺相关病毒载体均沿肺血管分布。荧光定量PCR实验显示,基因敲减(AAV1⁃KLF4⁃ shRNA)组大鼠肺小动脉中 KLF4 的 mRNA 表达量明显低于其他两组。血流动力学检测结果显示,盐水模 型组及对照病毒载体组的右心室收缩压和平均右心室压均明显高于健康对照组,而接受肺血管 KLF4 基 因敲减的大鼠的右心室收缩压和平均右心室压均明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。HE 染色及右 心肥厚指数结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的肺小血管重构及心室重构程度明显高于健康对照组,而接受肺血管 KLF4 基因敲减的大鼠的肺小血管重构及心室重构程度明显低于盐水模型组及对照病 毒载体组。结论 肺血管特异性 KLF4 基因敲减模型构建成功并成功地在肺动脉高压中发挥作用,为进 一步深入研究肺动脉高压的发病机制提供了平台和实验基础。