经后增殖方对控制性超促排卵大鼠卵巢GDF9分泌及颗粒细胞凋亡的影响

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2024.07.007

摘要/Abstract

摘要：

目的观察益气血法经后增殖方通过p38MAPK/CK2/IκBα/NF-κB通路对控制性超促排卵（COH）大鼠卵巢GDF9分泌及颗粒细胞（GCs）凋亡的影响。方法建立COH大鼠模型，18只大鼠随机分为自然排卵组（NO组）、COH组、COH+经后增殖方组（COH+JHZZG组）。qRT-PCR和Western blot法检测p38MAPK、CK2、IκBα、NF-κB、GDF9 mRNA和蛋白的表达水平，TUNEL法检测卵巢GCs凋亡率。结果与NO组比较，COH组大鼠卵巢组织p38MAPK、NF-κB表达升高，CK2、IκBα、GDF9表达下降，卵巢GCs凋亡率升高，差异有统计学意义（P < 0.01）；与COH组比较，COH+JHZZG组大鼠卵巢组织p38MAPK、NF-κB表达下降，CK2、IκBα、GDF9表达升高，差异有统计学意义（P < 0.01）；卵巢GCs凋亡率下降，差异有统计学意义（P < 0.05）。结论益气血法经后增殖方通过p38MAPK/CK2/IκBα/NF-κB通路促进COH大鼠卵巢GDF9的分泌，抑制卵巢GCs的凋亡，从而提高COH卵细胞质量。

关键词: 经后增殖方, 控制性超促排卵, p38MAPK, NF-κB, GDF9, 细胞凋亡

Abstract:

Objective To explore the effects of Jinghou Zengzhi Granules（JHZZG）， on ovarian GDF9 secretion and granulosa cells（GCs） apoptosis in controlled ovarian hyperstimulation（COH） rats through p38MAPK/CK2/IκBα/NF-κB pathway. Methods A model of COH rats was prepared and 18 rats were randomly divided into 3 groups， including natural ovulation group（NO group）， COH group， and COH+JHZZG group. The expression of p38MAPK， CK2， IκBα， NF-κB， GDF9 mRNA and protein were detected by qRT-PCR and Western blot， and the apoptosis rate of ovarian GCs by TUNEL. Results Compared with the NO group， the expression of p38MAPK and NF-κB in the ovarian tissue of rats in the COH group increased， while the expression of CK2， IκBα and GDF9 decreased， and the apoptosis rate of ovarian GCs increased （all P < 0.01）. Compared with the COH group， the expression of p38MAPK and NF-κB in the ovarian tissue of rats in the COH+JHZZG group decreased， while the expression of CK2， IκBα and GDF9 increased （all P < 0.01）， and the apoptosis rate of ovarian GCs decreased （P < 0.05）. Conclusion Jinghou Zengzhi Granules could promote the secretion of ovarian GDF9 and inhibit the apoptosis of ovarian GCs of COH rats through p38MAPK/CK2/IκBα/NF-κB signaling pathway， which thereby improve the quality of COH oocytes.

Key words: Jinghou Zengzhi Granules, controlled ovarian hyperstimulation, p38MAPK, NF-κB, GDF9, apoptosis

中图分类号:

R271

杨贞,江少如,陈小燕,陈晓琳,邓伟民,郭新宇. 经后增殖方对控制性超促排卵大鼠卵巢GDF9分泌及颗粒细胞凋亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(7): 918-923.

Zhen YANG,Shaoru JIANG,Xiaoyan CHEN,Xiaolin CHEN,Weimin DENG,Xinyu. GUO. Effect of Jinghou Zengzhi Granules on ovarian GDF9 secretion and granulosa cells apoptosis in controlled ovarian hyperstimulation rats[J]. The Journal of Practical Medicine, 2024, 40(7): 918-923.

图/表 5

表1

表2

图1

图2

表3

参考文献 24

1	LI W D， ZANG C J， YIN S， et al. Metformin protects against mouse oocyte apoptosis defects induced by arecoline［J］. Cell Prolif， 2020， 53（7）： e12809. doi:10.1111/cpr.12809 doi: 10.1111/cpr.12809
2	LIÑÁN A， LAWRENZ B， KHATIB I EL， et al. Clinical reassessment of human embryo ploidy status between cleavage and blastocyst stage by next generation sequencing［J］. PLoS One， 2018，13（8）：e201652． doi:10.1371/journal.pone.0201652 doi: 10.1371/journal.pone.0201652
3	谭新，赵彦鹏，张金玉，等. 益气血补肝肾中药对辅助生殖技术胚胎质量的影响［J］. 实用医学杂志， 2013，29（22）：3761-3763.
4	杨贞，郭新宇，刘佳子，等. 经后增殖方含药血清对超排卵大鼠卵巢COCs及CCs中GDF9与Bim表达的影响［J］. 重庆医学，2017，46（35）：4908-4911，4916. doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.35.004 doi: 10.3969/j.issn.1671-8348.2017.35.004
5	ALMEIDA C P， FERREIRA MÁRCIA C F， SILVEIRA C O， et al. Clinical correlation of apoptosis in human granulosa cells-A review［J］. Cell Biol Int， 2018，42（10）：1276-1281. doi:10.1002/cbin.11036 doi: 10.1002/cbin.11036
6	付靖波，张红霞，朱海英. 颗粒细胞凋亡调控机制及其在卵泡发育中的作用［J］. 中国临床医学， 2020，27（5）： 857-860. doi:10.12025/j.issn.1008-6358.2020.20191161 doi: 10.12025/j.issn.1008-6358.2020.20191161
7	IBRAHIM M A， ALBAHLOL I A， WANI F A， et al. Resveratrol Protects against Cisplatin-induced Ovarian and Uterine Toxicity in Female Rats by Attenuating Oxidative Stress， Inflammation and Apoptosis［J］. Chem Biol Interact， 2021，338（4）：109402. doi:10.1016/j.cbi.2021.109402 doi: 10.1016/j.cbi.2021.109402
8	ZHANG X， YU T， GUO X， et al. Ufmylation regulates granulosa cell apoptosis via ER stress but not oxidative stress during goat follicular atresia［J］. Theriogenology， 2021，169（1）：47-55. doi:10.1016/j.theriogenology.2021.04.009 doi: 10.1016/j.theriogenology.2021.04.009
9	ROSSETTI R， FERRARI I， BESTETTI I，et al. Fundamental role of BMP15 in human ovarian folliculogenesis revealed by null and missense mutations associated with primary ovarian insufficiency［J］. Hum Mutat， 2020，41（5）：983-997. doi:10.1002/humu.23988 doi: 10.1002/humu.23988
10	连方. 中西医结合体外受精-胚胎移植研究进展及问题讨论［J］. 中国中西医结合杂志， 2021，41（2）：164-166.
11	CHEN H， LIU C， JIANG H， et al. Regulatory Role of miRNA-375 in Expression of BMP15/GDF9 Receptors and its Effect on Proliferation and Apoptosis of Bovine Cumulus Cells［J］. Cell Physiol Biochem， 2017，41（2）：439-450. doi:10.1159/000456597 doi: 10.1159/000456597
12	STOCKER W A， WALTON K L， RICHANI D， et al. A variant of human growth differentiation factor-9 that improves oocyte developmental competence［J］. J Biol Chem， 2020，295（23）：7981-7991. doi:10.1074/jbc.ra120.013050 doi: 10.1074/jbc.ra120.013050
13	MORIKAWA R， KYOGOKU H， LEE J， et al. Oocyte-derived growth factors promote development of antrum-like structures by porcine cumulus granulosa cells in vitro［J］. J Reprod Dev， 2022，68（4）：238-245. doi:10.1262/jrd.2022-023 doi: 10.1262/jrd.2022-023
14	JIN J， MA Y， TONG X， etal. Metform ininhibits testosterone-induced endoplasmic reticulum stress in ovarian granulosa cells via inactivation of p38MAPK［J］. Hum Reprod， 2020，35（5）：1145-1158. doi:10.1093/humrep/deaa077 doi: 10.1093/humrep/deaa077
15	JOHNSON G L， LAPADAT R. Mitogen-activated protein kinase pathways mediated by ERK， JNK， and p38 protein kinases［J］. Science， 2002，298（5600）：1911-1912. doi:10.1126/science.1072682 doi: 10.1126/science.1072682
16	WANG X， LI C， WANG Y， et al. UFL1 Alleviates LPS-Induced Apoptosis by Regulating the NF-κB Signaling Pathway in Bovine Ovarian Granulosa Cells［J］. Biomolecules， 2020，10（2）：260. doi:10.3390/biom10020260 doi: 10.3390/biom10020260
17	ZHANG C， GONG P， YE Y， et al. NF-kappaB-vimentin is involved in steroidogenesis stimulated by mono-butyl phthalate in primary cultured ovarian granulosa cells［J］. Toxicol In Vitro，2017，45（1）：25-30. doi:10.1016/j.tiv.2017.07.012 doi: 10.1016/j.tiv.2017.07.012
18	CAI Q H， TANG Y， FAN S H， et al. In vivo effects of dexmedetomidine on immune function and tumor growth in rats with ovarian cancer through inhibiting the p38MAPK/NF-kappaB signaling pathway［J］. Biomed Pharmacother， 2017，95（1）：1830-1837. doi:10.1016/j.biopha.2017.09.086 doi: 10.1016/j.biopha.2017.09.086
19	CAPECE D， VERZELLA D， FRANCESCO B D， et al.NF-κB and mitochondria cross paths in cancer： mitochondrial metabolism and beyond［J］. Semin Cell Dev Biol， 2020，98（1）：118-128. doi:10.1016/j.semcdb.2019.05.021 doi: 10.1016/j.semcdb.2019.05.021
20	NAKAMURA S， NUMATA G， YAMAGUCHI T， et al. Endoplasmic reticulum stress-activated nuclear factor-kappa B signaling pathway induces the upregulation of cardiomyocyte dopamine D1 receptor in heart failure［J］. Biochem Biophys Res Commun，2022，637（1）：247-253. doi:10.1016/j.bbrc.2022.11.031 doi: 10.1016/j.bbrc.2022.11.031
21	KUSAGAWA E， OKUDA C， YAMAGUCHI R， et al. Cucurbitacin B Down-Regulates TNF Receptor 1 Expression and Inhibits the TNF-α-Dependent Nuclear Factor κB Signaling Pathway in Human Lung Adenocarcinoma A549 Cells［J］. Int J Mol Sci，2022，23（13）：7130. doi:10.3390/ijms23137130 doi: 10.3390/ijms23137130
22	孙六娜，卢如玲，张淑婷，等. 寿胎丸对肾虚型多囊卵巢综合征不孕患者子宫内膜容受性及相关因子的影响［J］. 实用医学杂志， 2023， 39 （3）： 355-359. doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2023.03.016 doi: 10.3969/j.issn.1006-5725.2023.03.016
23	孙力，谭季春. 中西医结合在辅助生殖技术中的应用［J］. 中国中西医结合杂志， 2020，40（2）：252-256. doi:10.7661/j.cjim.20191222.269 doi: 10.7661/j.cjim.20191222.269
24	杨贞，郭新宇，李海霞，等. 益气血法对超排卵小鼠卵巢颗粒细胞Bcl-2、Bax、Caspase3表达的影响［J］. 实用医学杂志， 2017，33（13）：2105-2108. doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2017.13.009 doi: 10.3969/j.issn.1006-5725.2017.13.009

基因名称	引物序列（5′-3′）		扩增长度（bp）
r-GAPDH	Forward：	GCAAGGATACTGAGAGCAAGAG	98
r-GAPDH	Reverse：	GGATGGAATTGTGAGGGAGATG	98
r-p38MAPK	Forward：	CCAGCTAAGAAAGCTGCAAAC	101
r-p38MAPK	Reverse：	GGCTGTGTCTAATGACCCTATT	101
r-CK2	Forward：	CCGCGGACATAAAGATGAGTAG	98
r-CK2	Reverse：	GTCTTCATCCACCTCACAGAAG	98
r-IκBα	Forward：	CCTTCCTCAACTTCCAGAACAA	105
r-IκBα	Reverse：	GATCACAGCCAGCTTTCAGA	105
r-NF-κB	Forward：	CATGCGTTTCCGTTACAAGTG	111
r-NF-κB	Reverse：	CCCGTGTAGCCATTGATCTT	111
r-GDF9	Forward：	GTTCTCTCTGATAGGCGAAGTG	127
r-GDF9	Reverse：	GGTGACTTCTGCTGGGTTTA	127

组别	例数	p38MAPK	CK2	IκBα	NF-κB	GDF9
NO组	6	1.157 ± 0.206	1.248 ± 0.260	1.155 ± 0.203	0.968 ± 0.097	1.113 ± 0.134
COH组	6	4.355 ± 0.626^*	0.290 ± 0.073^*	0.605 ± 0.094^*	3.458 ± 0.383^*	0.300 ± 0.089^*
COH+JHZZG组	6	2.760 ± 0.644^*△	0.575 ± 0.086^*△	2.488 ± 0.571^*△	2.393 ± 0.323^*△	0.573 ± 0.026^*△
校正F值		75.236	45.576	43.222	148.933	70.690
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

组别	例数	凋亡率
NO组	6	0.255 ± 0.032
COH组	6	0.368 ± 0.033^*
COH+JHZZG组	6	0.266 ± 0.070^△
F值		10.107
P值		0.002

[1]	肖凌,高春蕾,郭伟,王宁,张萱,刘明. 党参多糖通过调控MAPK/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织的保护作用[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(7): 948-954.
[2]	李小琴,汪乐新,马小军,李娜,卢冠军,张智涵,张鹏程. 高同型半胱氨酸经TRPC6/NF⁃κB诱导肾小球足细胞铁死亡的机制[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(2): 174-181.
[3]	刘敏,陈喜云,吕建磊,冯洁. ALKBH5通过TRAF1/NF⁃κB通路减轻脓毒症心肌损伤的机制[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(17): 2381-2389.
[4]	史秀丽,陈嘉琪,朱璠,曾娟,吴娜. miR-143-3p靶向调控TLR2/ NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(15): 2056-2062.
[5]	李明娟李学欣刘力 . 短时间机械通气对脓毒症大鼠膈肌功能的影响 [J]. 实用医学杂志, 2023, 39(5): 579-590.
[6]	李艳超,任巧利. CXCL16募集Th17细胞分泌IL-17A抗急性B淋巴细胞白血病细胞凋亡的实验研究[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(24): 3163-3168.
[7]	张华明,何婉珊,韩芸,陈冠桥,陈斌,韦之富,伍恒英,文斌. 基于转录组测序探索腺苷脱氨酶1对宫颈癌细胞的调控机制[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(24): 3169-3174.
[8]	李俊杰,白文娅,陈文栋,杨伟,邵建林. miR-27a-3p靶向Rnd3对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞凋亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(23): 3051-3057.
[9]	张正花,龚荣府,方文. 敲除成纤维细胞生长因子2基因抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移侵袭并促进细胞凋亡[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(22): 2885-2890.
[10]	王泽琪,高艺花,金玥彤,丛姗姗,金铉顺. 五味子乙素对甲状腺功能亢进性心肌病大鼠的影响[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(22): 2940-2945.
[11]	姜盛楠,支文冰,张红,王晓婷,孙婷婷,许宗仁,陈静,李晔,刘洋. 基于TLR4-NF-κB信号通路的槐果碱改善人支气管上皮细胞炎症和黏液高分泌的机制[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(19): 2461-2468.
[12]	雷小林,刘燕秀,张婵. miR-21-3p/p53信号通路对缺血/再灌注损伤小鼠的肾脏保护作用及其机制[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(19): 2475-2482.
[13]	许云春,于馨雅,王雅芝,申元英,郭乐. LncRNA NEAT1调控NF-κB信号通路对棕榈酸诱导的LO2细胞损伤与炎症反应的影响[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(17): 2164-2170.
[14]	李林,殷月,王晨晨,庄宝祥,王岱君. 氢气抑制TL1A/DR3通路对兔肢体缺血-再灌注后心肌细胞凋亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(16): 2037-2042.
[15]	易莎,胡楠,李粤,杨林,张玉婷,熊霞,钟桂书,陈燕. 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ对P. acnes诱导的人角质形成细胞焦亡、增殖及凋亡的影响[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(16): 2043-2049.