miR-483-3p 对乏氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和焦亡的作用研究

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2025.03.005

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨 miR-483-3p 对乏氧/复氧（hypoxia/reoxygenation， H/R）诱导的H9c2心肌细胞凋亡和焦亡的影响及其可能机制。方法体外培养大鼠H9c2心肌细胞，腺相关病毒感染H9c2及三气培养箱构建H/R模型，将细胞随机分为空白对照（Sham）组、模型（H/R）组、AAV-miR-483-3p mimic+H/R（AAV-miR-483-3p）组、AAV-miR-483-3p 阴性对照+H/R（AAV-NC）组。使用倒置显微镜观察各组细胞生长状态；细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖活性；乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测各组细胞 LDH 释放量；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；缺口末端标记法（TUNEL）法检测各组细胞凋亡情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞IL-1β、GSDMD蛋白的表达水平。结果与Sham组相比，H/R组细胞状态异常且细胞死亡数量增多、细胞活性下降、LDH释放量增多、细胞凋亡率及凋亡水平升高、IL-1β、GSDMD蛋白的表达水平升高（P < 0.05）；与H/R组相比较，AAV-miR-483-3p组细胞状态得到改善且细胞死亡数量较少、细胞增殖活性上升、LDH释放量下降、细胞凋亡率及凋亡水平降低、IL-1β及GSDMD蛋白的表达水平降低（P < 0.05）。结论过表达miR-483-3p可通过提升细胞活性、细胞代谢、抑制细胞凋亡及细胞焦亡的机制改善 H/R 诱导的 H9c2 心肌细胞损伤。

关键词: miR-483-3p, 心肌缺血再灌注损伤, 细胞凋亡, 细胞焦亡

Abstract:

Objective To investigate the effects of miR-483-3p on hypoxia/reoxygenation （H/R）-induced apoptosis and pyroptosis of H9c2 cardiomyocytes and its possible mechanism. Methods Rat H9c2 cardiomyocytes were cultured in vitro，adeno-associated virus-infected H9c2 and the H/R model were constructed by triple-air incubator， and the cells were randomly divided into blank control （Sham） group， model （H/R） group， AAV-miR-483-3p mimic+H/R （AAV-miR-483-3p） group， AAV-miR-483-3p negative control+H/R （AAV-NC） group. The growth status of cells in each group was observed using an inverted microscope； cell proliferation activity was detected by cell counting kit-8 （CCK-8）； LDH release by lactate dehydrogenase （LDH） kit； apoptosis rate by flow cytometry； apoptosis by notched end labeling （TUNEL）.Western blot （WB） was used to detect the expression levels of IL-1β and GSDMD proteins in each group. Results Compared with the Sham group， the H/R group showed abnormal cell status and increased cell death， decreased cell activity， increased LDH release， increased apoptosis rate and apoptosis level， and increased expression levels of IL-1β and GSDMD proteins （P < 0.05）； compared with the H/R group， the AAV-miR-483-3p group showed improved cell status and less cell death， increased cell proliferation activity， increased LDH release， and increased IL-1β and GSDMD protein expression levels （P < 0.05）. Compared with the H/R group， the AAV-miR-483-3p group showed improved cell status and less cell death， increased cell proliferation activity， decreased LDH release， decreased apoptosis rate and apoptosis level， and decreased expression of IL-1β and GSDMD proteins （P < 0.05）. Conclusion Over-expression of miR-483-3p can improve H/R-inducedH9c2 cardiomyocyte injury by enhancing cell activity and cell metabolism， and inhibiting apoptosis and cell charring.

Key words: miR-483-3p, myocardial ischemia-reperfusion injury, apoptosis, cellular pyroptosis

中图分类号:

R318.08

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