miR-365a-3p通过TGF-β信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期的发病机制

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2024.16.011

摘要/Abstract

摘要：

目的探究微小RNA（miRNA）-365a-3p影响血管内皮细胞功能参与子痫前期（PE）的发病机制。方法分离原代人脐静脉内皮细胞（HUVECs），设为NC组（转染miR-365a-3p NC）、mimics组（转染miR-365a-3p mimics）、inhibitor组（转染miR-365a-3p inhibitor），另取对数期细胞设为空白组。检测各组增殖、迁移及血管形成能力。双荧光素酶实验验证miR-365a-3p与下游基因的靶向关系。检测各组TGF-β₁、Smad4、Smad7蛋白表达。结果与空白组、NC组比较，mimics组24、48、72 h吸光度值及迁移率降低（P < 0.05），每个视野的管状结构数量减少（P < 0.05），inhibitor组24、48、72 h吸光度值及迁移率升高（P < 0.05），每个视野的管状结构数量增加（P < 0.05）。双荧光素酶实验表明Smad7是miR-365a-3p的一个靶基因。与空白组、NC组比较，mimics组转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、Smad4蛋白表达升高（P < 0.05），Smad7蛋白表达降低（P < 0.05），inhibitor组TGF-β₁、Smad4蛋白表达降低（P < 0.05），Smad7蛋白表达升高（P < 0.05）。结论 miR-365a-3p可能通过调控下游TGF-β信号通路影响血管内皮细胞功能，从而参与PE发病。

关键词: 子痫前期, 微小RNA-365a-3p, 血管内皮细胞功能, 转化生长因子-β

Abstract:

Objective To explore the mechanism of microRNA （miRNA）-365a-3p affecting the function of vascular endothelial cells involved in the pathogenesis of preeclampsia （PE）. Methods Primary human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） were set as a NC group （transfected miR-365a-3p NC）， a mimics group （transfected miR-365a-3p mimics） and a inhibitor group （transfected miR-365a-3p inhibitor）. Logarithmic HUVECs cells were set as the blank group. The cell proliferation， migration and angiogenesis in each group were detected. Dual luciferin assay verified the targeting relationship between miR-365a-3p and downstream gene. The protein expressions of TGF-β₁， Smad4 and Smad7 in each group were detected. Results Compared with the blank group and the NC group， the absorbance value and mobility of 24， 48 and 72 h were decreased （P < 0.05）， the number of tubular structures per field were decreased in the mimics group （P < 0.05）， the absorbance value and mobility of 24， 48 and 72 h were increased （P < 0.05）， and the number of tubular structures per field were increased in the inhibitor group （P < 0.05）. Dual luciferin assay showed that Smad7 was a target gene of miR-365a-3p. Compared with the blank group and the NC group， the protein expressions of TGF-β₁ and Smad4 in the mimics group were increased （P < 0.05）， while the protein expression of Smad7 was decreased （P < 0.05）. The protein expression levels of TGF-β₁ and Smad4 in the inhibitor group were decreased （P < 0.05）， while the protein expression levels of Smad7 were increased （P < 0.05）. Conclusion miR-365a-3p may affect the function of vascular endothelial cells by regulating the downstream TGF-β signaling pathway， and thus participate in the pathogenesis of PE.

Key words: preeclampsia, microRNA-365a-3p, vascular endothelial cell function, transforming growth factor beta

中图分类号:

R714.24⁺5

严兆华,郑健彬,张娜,曹春燕,颜露春. miR-365a-3p通过TGF-β信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期的发病机制[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(16): 2263-2269.

Zhaohua YAN,Jianbin ZHENG,Na ZHANG,Chunyan CAO,Luchun. YAN. MiR⁃365a⁃3p affects vascular endothelial cell function through TGF⁃β signaling pathway and participates in the pathogenesis of preeclampsia[J]. The Journal of Practical Medicine, 2024, 40(16): 2263-2269.

图/表 6

表 1

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图 2

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表 2

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参考文献 25

1	JUNG E， ROMERO R， YEO L， et al. The etiology of preeclampsia［J］. Am J Obstet Gynecol， 2022， 226（2S）：S844-S866. doi:10.1016/j.ajog.2021.11.1356 doi: 10.1016/j.ajog.2021.11.1356
2	TURBEVILLE H R， SASSER J M. Preeclampsia beyond pregnancy： long-term consequences for mother and child［J］. Am J Physiol Renal Physiol， 2020， 318（6）：F1315-F1326. doi:10.1152/ajprenal.00071.2020 doi: 10.1152/ajprenal.00071.2020
3	MURUGESAN S， HUSSEY H， SARAVANAKUMAR L， et al. Extracellular Vesicles From Women With Severe Preeclampsia Impair Vascular Endothelial Function［J］. Anesth Analg， 2022， 134（4）：713-723. doi:10.1213/ane.0000000000005812 doi: 10.1213/ane.0000000000005812
4	BAO S， ZHOU T， YAN C， et al. A blood-based miRNA signature for early non-invasive diagnosis of preeclampsia［J］. BMC Med， 2022， 20（1）：303. doi:10.1186/s12916-022-02495-x doi: 10.1186/s12916-022-02495-x
5	FRANCZYK B， GLUBA-BRZÓZKA A， OLSZEWSKI R， et al. miRNA biomarkers in renal disease［J］. Int Urol Nephrol， 2022， 54（3）：575-588. doi:10.1007/s11255-021-02922-7 doi: 10.1007/s11255-021-02922-7
6	NOSALSKI R， SIEDLINSKI M， DENBY L， et al. T-Cell-Derived miRNA-214 Mediates Perivascular Fibrosis in Hypertension［J］. Circ Res， 2020， 126（8）：988-1003. doi:10.1161/circresaha.119.315428 doi: 10.1161/circresaha.119.315428
7	李晖，焦顺，郑晓丹，等.子痫前期胎盘组织miRNA差异表达谱生物学分析及miR-365a-3p参与发病的机制探讨［J］.山东医药， 2020， 60（11）：29-33.
8	MELCHIORRE K， GIORGIONE V， THILAGANATHAN B. The placenta and preeclampsia： villain or victim？［J］. Am J Obstet Gynecol， 2022， 226（2S）：S954-S962. doi:10.1016/j.ajog.2020.10.024 doi: 10.1016/j.ajog.2020.10.024
9	JUNG E， ROMERO R， YEO L， et al. The etiology of preeclampsia［J］. Am J Obstet Gynecol， 2022， 226（2S）：S844-S866. doi:10.1016/j.ajog.2021.11.1356 doi: 10.1016/j.ajog.2021.11.1356
10	吕鑫，张为远，张靖霄，等. 早发与晚发子痫前期高危因素的对比分析［J］. 中华妇产科杂志， 2021， 56（11）：760-766.
11	CHOURDAKIS E， OIKONOMOU N， FOUZAS S， et al. Preeclampsia Emerging as a Risk Factor of Cardiovascular Disease in Women［J］. High Blood Press Cardiovasc Prev， 2021， 28（2）：103-114. doi:10.1007/s40292-020-00425-7 doi: 10.1007/s40292-020-00425-7
12	OVERTON E， TOBES D， LEE A. Preeclampsia diagnosis and management［J］. Best Pract Res Clin Anaesthesiol， 2022， 36（1）：107-121. doi:10.1016/j.bpa.2022.02.003 doi: 10.1016/j.bpa.2022.02.003
13	ISHIMWE J A. Maternal microbiome in preeclampsia pathophysiology and implications on offspring health［J］. Physiol Rep， 2021， 9（10）：e14875. doi:10.14814/phy2.14875 doi: 10.14814/phy2.14875
14	高丽欣，张玉媛，李烁，等.子痫前期患者血清CXCL16，FGF21表达水平及临床意义［J］.实用医学杂志， 2020， 36（8）：1102-1106.
15	BAO S， ZHOU T， YAN C， et al. A blood-based miRNA signature for early non-invasive diagnosis of preeclampsia［J］. BMC Med， 2022， 20（1）：303. doi:10.1186/s12916-022-02495-x doi: 10.1186/s12916-022-02495-x
16	ASHRAF U M， HALL D L， RAWLS A Z， et al. Epigenetic processes during preeclampsia and effects on fetal development and chronic health［J］. Clin Sci （Lond）， 2021， 135（19）：2307-2327. doi:10.1042/cs20190070 doi: 10.1042/cs20190070
17	BRANCACCIO M， GIACHINO C， IAZZETTA A M， et al. Integrated Bioinformatics Analysis Reveals Novel miRNA as Biomarkers Associated with Preeclampsia［J］. Genes （Basel）， 2022， 13（10）：1781. doi:10.3390/genes13101781 doi: 10.3390/genes13101781
18	LV H， TIAN M， HU P， et al. Overexpression of miR-365a-3p relieves sepsis-induced acute myocardial injury by targeting MyD88/NF-κB pathway［J］. Can J Physiol Pharmacol， 2021， 99（10）：1007-1015. doi:10.1139/cjpp-2020-0646 doi: 10.1139/cjpp-2020-0646
19	LI J， MO R， ZHENG L. Inhibition of the cell migration， invasion and chemoresistance of colorectal cancer cells through targeting KLF3 by miR-365a-3p［J］. J Cancer， 2021， 12（20）：6155-6164. doi:10.7150/jca.61967 doi: 10.7150/jca.61967
20	HONG Y G， XIN C， ZHENG H， et al. miR-365a-3p regulates ADAM10-JAK-STAT signaling to suppress the growth and metastasis of colorectal cancer cells［J］. J Cancer， 2020， 11（12）：3634-3644. doi:10.7150/jca.42731 doi: 10.7150/jca.42731
21	TIAN J， ADAMS M J， TAY J W T， et al. Estradiol-Responsive miR-365a-3p Interacts with Tissue Factor 3'UTR to Modulate Tissue Factor-Initiated Thrombin Generation［J］. Thromb Haemost， 2021， 121（11）：1483-1496. doi:10.1055/a-1382-9983 doi: 10.1055/a-1382-9983
22	王世芳，旦丽，蒋映雪，等.lncRNA OTUD6B-AS1靶向miR-365a-3p对人绒毛膜滋养层细胞增殖、迁移及侵袭的影响［J］.中国优生与遗传杂志， 2022，30（6）：953-957.
23	LIU J， SONG G， ZHAO G， et al. Gene polymorphism associated with TGF-β1 and susceptibility to preeclampsia： A meta-analysis and trial sequential analysis［J］. J Obstet Gynaecol Res， 2021， 47（6）：2031-2041. doi:10.1111/jog.14751 doi: 10.1111/jog.14751
24	XU X H， JIA Y， ZHOU X， et al. Downregulation of lysyl oxidase and lysyl oxidase-like protein 2 suppressed the migration and invasion of trophoblasts by activating the TGF-β/collagen pathway in preeclampsia［J］. Exp Mol Med， 2019， 51（2）：1-12. doi:10.1038/s12276-019-0211-9 doi: 10.1038/s12276-019-0211-9
25	黄笑梅，张伟红，吕小斐，等. 妊娠期高危型人乳头瘤病毒感染患者TGFβ-Smad表达与子痫的关系［J］. 中华医院感染学杂志， 2022， 32（5）：760-764.

组别	n	24 h	48 h	72 h
空白组	5	0.33 ± 0.03	0.55 ± 0.03	0.70 ± 0.06
NC组	5	0.34 ± 0.05	0.54 ± 0.06	0.71 ± 0.05
mimics组	5	0.15 ± 0.03^ab	0.37 ± 0.06^ab	0.42 ± 0.07^ab
inhibitor组	5	0.46 ± 0.05^ab	0.69 ± 0.08^ab	0.83 ± 0.09^ab
F值		49.118	23.667	31.588
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001

组别	n	TGF-β₁	Smad4	Smad7
空白组	5	0.15 ± 0.03	0.24 ± 0.03	0.59 ± 0.06
NC组	5	0.16 ± 0.03	0.23 ± 0.05	0.58 ± 0.06
mimics组	5	0.77 ± 0.08^ab	0.69 ± 0.07^ab	0.17 ± 0.03^ab
inhibitor组	5	0.11 ± 0.02^ab	0.08 ± 0.01^ab	0.99 ± 0.11^ab
F值		231.841	165.556	110.982
P值		< 0.001	< 0.001	< 0.001

[1]	于素美,张玉月,马丽文,况园军,常庆宁,孔敏,张慧萍. miR⁃15a⁃5p对子痫前期胎盘滋养细胞自噬的影响[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(12): 1631-1636.
[2]	李露,李秀娟. 基于西洋参总皂苷调控TGF-β1/Smad信号通路对压力性尿失禁大鼠模型盆底功能恢复的影响[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(19): 2450-2455.
[3]	肖燕璇,张立力,黎嘉琪,庄云婷,宋瑶,李文慧,谭天,陈海涛,王志坚. 单胎子痫前期孕妇产前体质量指数与母婴结局关系探讨[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(18): 2357-2361.
[4]	蔡燕丽朱锦明张跃辉栾晓梅彭凤云李青杜长江 . 子痫前期孕妇外周血、胎盘组织中信号肽⁃CUB⁃ 表皮生长因子样结构域蛋白2的表达及意义[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(12): 1518-1523.
[5]	高丽娜董燕何晓春张玉芳刘小玲郝曼张莉刘小晖 . 环状RNA circAAS1对人绒毛膜滋养细胞侵袭及迁移的影响[J]. 实用医学杂志, 2022, 38(17): 2151-2157.
[6]	吴琪瑞王艳华刘林英高丽娜殷荷张玉月韩可栋张慧萍, . miR⁃488⁃3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用研究 [J]. 实用医学杂志, 2021, 37(5): 601-605.
[7]	曹丹, 汤小芳, 李敏慧. miR⁃155⁃5p通过靶向抑制机制 Sirt1影响子痫前期发生的机制 [J]. 实用医学杂志, 2021, 37(4): 451-457.
[8]	彭永保, 张丽琼, 刘淮. 不同类型重度子痫前期患者脐动脉血HSP70表达与胎儿出生状况及短期预后的关系 [J]. 实用医学杂志, 2021, 37(16): 2084-2088.
[9]	殷荷, 王艳华, 吴琪瑞, 张辉, 高丽娜, 朱亚飞, 张慧萍, 吴凯, 姜怡邓. miR⁃5088⁃5p在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其对滋养细胞自噬的影响 [J]. 实用医学杂志, 2020, 36(24): 3312-3322.