龙胆苦甙上调大鼠LC3Ⅱ表达促进自噬缓解非酒精性脂肪性肝炎

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2023.16.003

实用医学杂志 ›› 2023, Vol. 39 ›› Issue (16): 2022-2028.doi: 10.3969/j.issn.1006-5725.2023.16.003

龙胆苦甙上调大鼠LC3Ⅱ表达促进自噬缓解非酒精性脂肪性肝炎

丁洁¹,刘思奇¹,王艺颖²,王霖³,施承宏⁴,王芳³,常国楫¹,华丽娟¹,陈华憶¹,李生浩¹(),王晴晴¹()

^1.昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心肝病综合科（昆明 650041 ）
^2.昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心科教学术部（昆明 650041 ）
^3.昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心病理科（昆明 650041 ）
^4.昆明市第三人民医院/云南省传染性疾病临床医学中心医务部（昆明 650041 ）

收稿日期:2023-03-14 出版日期:2023-08-25 发布日期:2023-09-26
通讯作者: 李生浩,王晴晴 E-mail:doctorlee3h@163.com;wangqingqing1511 @163.com;wangqingqing1511@163.com
基金资助:
国家自然科学基金地区科学基金项目(82260408);云南省科技厅基础研究专项面上项目(202101AT070054);昆明市卫健委卫生科研课题(2022-03-08-005)

Gentiopicroside promotes autophagy to alleviate nonalcoholic steatohepatitis in rats via up⁃regulating the expression of LC3Ⅱ

Jie DING¹,Siqi LIU¹,Yiying WANG²,Lin WANG³,Chenghong SHI⁴,Fang WANG³,Guoji CHANG¹,Lijuan HUA¹,Huayi CHEN¹,Shenghao LI¹(),Qingqing. WANG¹()

Department of Hepatopathy，the 3rd People′s Hospital of Kunming/Clinical?Medical Center of Infectious Disease of Yunnan Province，Kunming 650041，China

Received:2023-03-14 Online:2023-08-25 Published:2023-09-26
Contact: Shenghao LI,Qingqing. WANG E-mail:doctorlee3h@163.com;wangqingqing1511 @163.com;wangqingqing1511@163.com

摘要/Abstract

摘要：

目的明确龙胆苦甙对大鼠非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）的疗效，并初步探讨LC3Ⅱ基因及自噬在其中所起的作用及机制。方法建立SD大鼠NASH模型，分为：正常对照组、模型对照组、龙胆苦甙组、龙胆苦甙+3?MA组、二甲双胍阳性对照组，每组8只大鼠。给予相应治疗和处理4周后，通过q-PCR及Western blot分别检测大鼠肝组织LC3Ⅱ、LC3Ⅰ的mRNA和蛋白质表达，HE染色检测肝组织病理学情况，结合大鼠血清的血脂（CHOL和TG）、谷丙转氨酶以及炎症因子（IL-1β和TNF-α）水平的变化，评价龙胆苦甙对大鼠NASH的治疗效果，并初步探讨LC3Ⅱ及自噬在这一过程中所起的作用和机制。结果（1）正常对照组肝小叶结构正常，未见脂肪变及炎症损伤；模型对照组肝细胞索结构紊乱，出现严重肝脂肪变及炎症损伤，并可见点、片状坏死形成；龙胆苦甙组、二甲双胍阳性对照组肝脂肪变及炎症损伤均有所减轻；龙胆苦甙+3?MA组肝脂肪变和炎症损伤较龙胆苦甙组明显加重，肝小叶结构紊乱，坏死增多。（2）模型对照组ALT、CHOL、TG、IL-1β、TNF-α水平均较正常对照组升高，龙胆苦甙组、二甲双胍阳性对照组的ALT、CHOL、TG、IL-1β、TNF-α水平一定程度上得到逆转，而龙胆苦甙+3?MA组ALT、CHOL、TG、IL-1β、TNF-α水平又较龙胆苦甙组升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。（3）模型对照组大鼠肝组织LC3Ⅱ mRNA和蛋白质表达较正常对照组明显下调，这一趋势在龙胆苦甙组和二甲双胍阳性对照组中出现逆转，而龙胆苦甙+3?MA组的LC3Ⅱ mRNA和蛋白质表达又明显下调，差异有统计学意义（均P < 0.05）。结论龙胆苦甙可缓解大鼠NASH相关肝损伤，其机制可能与龙胆苦甙上调肝组织LC3Ⅱ表达从而促进了自噬有关。

Abstract:

Objective To clarify the effect of gentiopicroside on alleviating nonalcoholic steatohepatitis （NASH） in rats， and to explore the role of LC3II gene and autophagy in this process. Methods Establishment of SD rat NASH model was established and assigned to normal control group， model control group， gentiopicroside group， gentiopicroside+autophagy inhibitor 3-methyladenine group， metformin positive control group， 8 rats in each group. After 4 weeks of treatment， mRNA and protein expression of LC3Ⅱ were detected， LC3Ⅰ in liver tissue was assessed by q-PCR and Western blot， HE staining was performed for liver histopathology， the therapeutic effect of gentiopicroside on NASH in rats was evaluated with serum lipids （CHOL and TG）， alanine aminotransferase and inflammatory factor （IL-1β and TNF-α） changes. Results （1）In the normal control group， the structure of hepatic lobule was normal， without fatty change and inflammatory damage； In the model control group， the structure of hepatocyte cord was disordered， with severe liver steatosis and inflammatory damage， and spot and flaky necrosis was observed； The liver steatosis and inflammatory damage were alleviated in gentiopicroside group and metformin positive control group； Compared with gentiopicroside group， liver steatosis and inflammatory damage in gentiopicroside+3?MA group were significantly aggravated， and the structure of hepatic lobule was disordered and necrosis was increased. （2）The ALT， CHOL， TG， IL-1β， TNF-α levels of NASH model control group were significantly higher than those in the normal control group， the ALT， CHOL， TG， IL-1β， TNF-α levels of gentiopicroside group， metformin positive control group were reversed to some extent， while gentiopicroside+3?MA group the level of ALT， CHOL， TG， IL-1β， TNF-α is higher than that of gentiopicroside group， the difference was statistically significant， all P < 0.05. （3）The expression of LC3Ⅱ mRNA and protein in the liver tissue of rats in the model control group was significantly lower than that in the normal control group. This trend was reversed in the gentiopicroside group and the metformin positive control group， while the expression of LC3ⅡmRNA and protein in the gentiopicroside+3-MA group was significantly lower， the difference was statistically significant， all P < 0.05. Conclusion Gentiopicroside could alleviate NASH-related liver injury in rats. Its mechanism may be related to GPS up-regulating the expression of LC3Ⅱ in liver tissue and promoting autophagy

Key words: gentiopicroside, microtubule associated protein 1 light chain 3Ⅱ, microtubule associated protein 1 light chain 3Ⅰ, autophagy, non-alcoholic steatohepatitis

中图分类号:

R575.1

丁洁,刘思奇,王艺颖,王霖,施承宏,王芳,常国楫,华丽娟,陈华憶,李生浩,王晴晴. 龙胆苦甙上调大鼠LC3Ⅱ表达促进自噬缓解非酒精性脂肪性肝炎[J]. 实用医学杂志, 2023, 39(16): 2022-2028.

Jie DING,Siqi LIU,Yiying WANG,Lin WANG,Chenghong SHI,Fang WANG,Guoji CHANG,Lijuan HUA,Huayi CHEN,Shenghao LI,Qingqing. WANG. Gentiopicroside promotes autophagy to alleviate nonalcoholic steatohepatitis in rats via up⁃regulating the expression of LC3Ⅱ[J]. The Journal of Practical Medicine, 2023, 39(16): 2022-2028.

图/表 6

表1

图1

表2

表3

图2

图3

参考文献 29

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蛋白	正向引物（5′→3′）	反向引物（3′→5′）
LC3Ⅰ	GCCTGTCCTGGATAAGACCA	CCGTCTTCATCCTTCTCCTG
LC3Ⅱ	GTGTCCACACCCATCTCTGA	AGTCTTACACAGCCAGTGCT
GAPDH	CTCATGACCACAGTCCATGC	TTCAGCTCTGGGATGACCTT

组别	ALT （U/L）	CHOL （μmol/mL）	TG （mg/mL）
正常对照组	37.43 ± 0.27	0.543 9 ± 0.003 1	0.505 2 ± 0.004 2
模型对照组	67.44 ± 0.24^a	0.754 1 ± 0.002 1^a	0.617 3 ± 0.002 0^a
龙胆苦甙组	36.37 ± 0.20^b	0.555 3 ± 0.001 2^b	0.503 9 ± 0.002 5^b
龙胆苦甙+3-MA组	60.37 ± 0.22^c	0.694 0 ± 0.002 2^c	0.586 2 ± 0.003 0^c
二甲双胍阳性对照组	35.57 ± 0.26^b	0.547 2 ± 0.002 0^b	0.513 8 ± 0.003 1^b
F值	16.018	17.965	15.852
P值	< 0.05	< 0.05	< 0.05

组别	IL?1β	TNF?α
正常对照组	74.45 ± 0.20	49.52 ± 0.32
模型对照组	97.57 ± 0.30^a	68.46 ± 0.30^a
龙胆苦苷组	72.59 ± 0.32^b	49.47 ± 0.26^b
龙胆苦苷+3-MA组	86.49 ± 0.28^c	57.41 ± 0.37^c
二甲双胍阳性对照组	71.63 ± 0.33^b	50.63 ± 0.34^b
F值	16.127	15.179
P值	< 0.05	< 0.05

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龙胆苦甙上调大鼠LC3Ⅱ表达促进自噬缓解非酒精性脂肪性肝炎

Gentiopicroside promotes autophagy to alleviate nonalcoholic steatohepatitis in rats via up⁃regulating the expression of LC3Ⅱ

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