收稿日期: 2025-01-17
网络出版日期: 2025-07-02
基金资助
广东省自然科学基金项目(2023A1515011670);广东省医学科学技术研究基金项目(A2022287)
The effect of pseudouracil modifying enzyme 3 activating AKT pathway on malignant progression of glioblastoma
Received date: 2025-01-17
Online published: 2025-07-02
目的 体外探讨假尿嘧啶修饰酶3（PUS3）对胶质母细胞瘤（GBM）细胞恶性行为（增殖、凋亡、侵袭）的调控作用及分子机制，以期为GBM治疗提供新靶点。 方法 利用GEPIA2在线数据库分析PUS3在胶质母细胞瘤中的表达情况；Kaplan-Meier生存分析评估PUS3高表达患者与低表达患者的生存差异。通过qRT-PCR与Western blot检测PUS3在正常脑胶质细胞HEB细胞系及胶质母细胞瘤细胞系（U87、LN229、U251、T98G）中表达水平；构建PUS3稳定过表达的胶质母细胞瘤细胞株，采用克隆形成实验、CCK-8实验和流式细胞术评估PUS3对胶质母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响；Transwell实验证明过表达PUS3促进GBM细胞的侵袭；免疫组化检测GBM患者的PUS3表达情况。Western blot检测过表达PUS3后GBM细胞中肿瘤相关通路蛋白表达。 结果 PUS3在GBM患者组织中的表达是水平升高，在GBM细胞中的mRNA和蛋白表达量均显著高于HEB细胞（P < 0.01）。过表达PUS3后，GBM细胞增殖能力增强（P < 0.05）、凋亡率下降（P < 0.01），且侵袭细胞数增加（P < 0.001）。机制上，PUS3过表达显著激活AKT通路，在PUS3过表达细胞中使用AKT抑制剂可以逆转促癌效应。 结论 PUS3在GBM中高表达，通过激活AKT通路促进肿瘤细胞增殖、侵袭并抑制凋亡，提示其可作为GBM治疗的潜在靶标。
关键词： 假尿嘧啶修饰酶3; 胶质母细胞瘤; 细胞增殖; 细胞凋亡; 蛋白激酶B（AKT）
张畅 , 刘春汕 , 廖华英 , 吴宇超 , 田允鸿 . 假尿嘧啶修饰酶3激活AKT通路对胶质母细胞瘤恶性进展的影响[J]. 实用医学杂志, 2025 , 41(12) : 1825 -1834 . DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2025.12.008
Objective To investigate the regulatory effects and molecular mechanisms of PUS3 on GBM cell malignant behaviors （proliferation， apoptosis， invasion） in vitro， providing potential therapeutic targets for GBM. Methods The expression of PUS3 in GBM was analyzed using the GEPIA2 database.Kaplan-Meier survival analysis evaluated the survival difference between PUS3 high- and low-expression patients. qRT-PCR and Western blot were performed to detect PUS3 expression in normal glial cells （HEB） and GBM cell lines （U87， LN229， U251， T98G）. PUS3-stably overexpressing GBM cell lines were constructed. Colony formation， CCK-8 assay， and flow cytometry were used to assess proliferation and apoptosis. Transwell assay evaluated cell invasion. Immunohistochemistry （IHC） detected PUS3 expression in GBM patient tissues. Western blot analyzed tumor-related pathway proteins after PUS3 overexpression. Results The expression level of PUS3 is elevated in GBM patient tissues， and the mRNA and protein expression levels in GBM cells are significantly higher than those in HEB cells （P < 0.01）. After overexpression of PUS3， the proliferation ability of GBM cells was enhanced （P < 0.05）， the apoptosis rate decreased （P < 0.01）， and the number of invasive cells increased （P < 0.001）. Mechanistically， overexpression of PUS3 significantly activates the AKT pathway， and the use of AKT inhibitors in PUS3 overexpressing cells can reverse the pro cancer effect. Conclusion PUS3 is highly expressed in glioblastoma （GBM） and promotes tumor cell proliferation， invasion， and apoptosis inhibition by activating the AKT pathway， suggesting its potential as a therapeutic target for GBM treatment.
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