基于Wnt/β-catenin信号通路调控神经元损伤探讨脊髓伤方对脊髓型颈椎病的效应机制

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2025.10.009

摘要/Abstract

摘要：

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨脊髓伤方对脊髓型颈椎病的作用机制。方法将36只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组（TAK-715，50 mg/kg）、脊髓伤方低（9.7 g/kg）、中（19.4 g/kg）、高（38.8 g/kg）剂量组，每组6只，连续干预4周。观察术后1、2、4周BBB评分和斜板实验；HE和Nissl染色观察脊髓组织病理及神经元情况；免疫荧光检测BDNF、β-catenin、Bax、Bcl-2蛋白表达；Western blot及qRT-PCR检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及mRNA表达。结果与假手术组相比，模型组术后BBB评分和斜板试验评分显著降低（P < 0.05），BDNF、β-catenin、Bcl-2表达下降（P < 0.05），Bax表达升高（P < 0.05）；β-Catenin、LRP-6、p-GSK-3β表达下降（P < 0.05），Caspase-3、Caspase-9表达升高（P < 0.05）。与模型组相比，脊髓伤方高剂量组术后BBB评分和斜板试验评分显著升高（P < 0.05），BDNF、β-catenin、Bcl-2表达上升（P < 0.05），Bax表达下降（P < 0.05）；β-Catenin、LRP-6、p-GSK-3β表达上升（P < 0.05），Caspase-3、Caspase-9表达下降（P < 0.05）。结论脊髓伤方可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路，抑制神经元凋亡，改善脊髓微环境，促进神经功能恢复。

关键词: Wnt/β-catenin信号通路, 脊髓伤方, 颈椎病, 神经功能恢复

Abstract:

Objective To investigate the mechanism of Jisuishang Formula on cervical myelopathy based on Wnt/β-catenin signaling pathway. Methods Thirty-six adult male SD rats were randomly divided into sham operation group， model group， positive control group （TAK-715， 50 mg/kg）， Jisuishang Formula low （9.7 g/kg）， medium （19.4 g/kg） and high （38.8 g/kg） dose groups， with 6 rats in each group for 4 weeks. The BBB score and inclined plate test were observed at 1， 2 and 4 weeks after surgery. HE and Nissl staining were used to observe the histopathology and neuronal condition of the spinal cord. Immunofluorescence was used to detect the protein expressions of BDNF， β-catenin， Bax and Bcl-2. Western blot and qRT-PCR were used to detect the expression of Wnt/β-catenin signaling pathway-related proteins and mRNAs. Results Compared with the sham group， the BBB score and inclined plate test score were significantly decreased （P < 0.05）， the expressions of BDNF， β-catenin and Bcl-2 decreased （P < 0.05）， the expression of Bax increased （P < 0.05）， the expressions of β-catenin， LRP-6 and p-GSK-3βdecreased （P < 0.05）， and the expressions of Caspase-3 and Caspase-9 increased （P < 0.05）. Compared with the model group， the BBB score and inclined plate test score were significantly increased in the high-dose Jisuishang Formula group （P < 0.05）， the expressions of BDNF， β-catenin and Bcl-2 increased （P < 0.05）， the expression of Bax decreased （P < 0.05）， the expressions of β-catenin， LRP-6 and p-GSK-3βincreased （P < 0.05）， and the expressions of Caspase-3 and Caspase-9 decreased （P < 0.05）. Conclusion Jisuishang Formula prescription can inhibit neuronal apoptosis， improve spinal cord microenvironment， and promote neurological function recovery by activating the Wnt/β-catenin signaling pathway.

Key words: Wnt/β-catenin signaling pathway, Jisuishang Formula, cervical spondylosis, neurological recovery

中图分类号:

R274.9

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图/表 11

表1

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参考文献 28

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基因	正向序列（5′?3′）	反向序列（3′?′5）
β?Catenin	TTGCCACCCGTGCAATTCCT	CTGAGGGGAGCGCATGATGG
LRP?6	CTCGTCTTTCACTCATCTCG	ATCTTCTTGTGCCTTTCGGA
Caspase?3	AAGCCGAAACTCTTCATC	TGAGCATTGACACAATACAC
Caspase?9	GTGAAGAACGACCTG ACT	AGGATGAC CACCACAAAG
GAPDH	GCCTCCTCCAATTCAACCCT	CTCGTGGTTCACACCCATCA

组别	术后1周/分	术后2周/分	术后4周/分
假手术组	21.00 ± 0.00	20.66 ± 0.57	20.66 ± 0.57
模型组	3.43 ± 0.20^?	5.36 ± 0.41^?	7.53 ± 0.25^?
阳性对照组	7.00 ± 0.36^?#	11.40 ± 0.75^?#	17.16 ± 0.23^?#
脊髓伤方低剂量组	4.10 ± 0.20^?#	7.60 ± 0.45^?#	10.13 ± 0.30^?#
脊髓伤方中剂量组	5.30 ± 0.30^?#	8.40 ± 0.46^?#	13.40 ± 0.45^?#
脊髓伤方高剂量组	7.76 ± 0.35^?#	12.83 ± 0.70^?#	17.63 ± 0.15^?#
F值	1 800.13	265.94	573.52
P值	< 0.001	< 0.001	< 0.001

组别	术后1周/°	术后2周/°	术后4周/°
假手术组	51.00 ± 1.00	50.33 ± 0.57	51.00 ± 1.00
模型组	20.00 ± 1.00^?	24.00 ± 1.00^?	25.66 ± 1.15^?
阳性对照组	30.00 ± 1.00^?#	37.33 ± 1.52^?#	43.00 ± 2.00^?#
脊髓伤方低剂量组	21.66 ± 1.52^?	26.66 ± 1.15^?#	31.33 ± 1.52^?#
脊髓伤方中剂量组	26.66 ± 1.52^?#	31.00 ± 1.00^?#	36.66 ± 0.57^?#
脊髓伤方高剂量组	30.66 ± 0.57^?#	39.66 ± 1.52^?#	44.33 ± 0.57^?#
F值	279.90	202.44	165.77
P值	< 0.001	< 0.001	< 0.001

组别	Bcl-2	Bax	BDNF	β-catenin
假手术组	3.77 ± 0.22	0.88 ± 0.04	3.41 ± 0.22	3.74 ± 0.16
模型组	0.96 ± 0.20^?	3.22 ± 0.11^?	0.71 ± 0.14^?	0.68 ± 0.05^?
阳性对照组	2.67 ± 0.21^?#	1.26 ± 0.23^?#	2.97 ± 0.14^?#	2.86 ± 0.06^?#
脊髓伤方低剂量组	1.37 ± 0.05^?#	2.49 ± 0.15^?#	1.44 ± 0.08^?#	1.38 ± 0.12^?#
脊髓伤方中剂量组	1.82 ± 0.20^?#	1.82 ± 0.04^?#	2.11 ± 0.13^?#	1.98 ± 0.19^?#
脊髓伤方高剂量组	2.60 ± 0.36^?#	1.19 ± 0.03^?#	3.01 ± 0.04^?#	2.95 ± 0.06^?#
F值	279.90	202.44	165.77	249.67
P值	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001

组别	β?catenin	LRP?6	Caspase?3	Caspase?9
假手术组	1.00 ± 0.01	1.00 ± 0.02	1.03 ± 0.06	1.01 ± 0.03
模型组	0.33 ± 0.02^?	0.35 ± 0.02^?	4.03 ± 0.15^?	4.22 ± 0.04^?
阳性对照组	0.80 ± 0.04^?#	0.85 ± 0.03^?#	1.93 ± 0.15^?#	2.06 ± 0.08^?#
脊髓伤方低剂量组	0.45 ± 0.03^?#	0.45 ± 0.03^?#	3.27 ± 0.21^?#	3.56 ± 0.08^?#
脊髓伤方中剂量组	0.58 ± 0.03^?#	0.61 ± 0.03^?#	2.73 ± 0.25^?#	2.95 ± 0.08^?#
脊髓伤方高剂量组	0.81 ± 0.03^?#	0.85 ± 0.02^?#	1.97 ± 0.21^?#	1.95 ± 0.06^?#
F值	315.77	372.24	103.49	970.18
P值	< 0.001	< 0.001	< 0.001	< 0.001