白刺花叶总生物碱通过抑制MAPK/NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2024.20.004

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨白刺花叶总生物碱（Sophora davidii Hance leaves total alkaloids，SDLTAs）的体外抗炎作用及可能的分子机制。方法采用脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞炎症模型，给予不同浓度（50、100、200 μg/mL）SDLTAs，Griess法检测SDLTAs对细胞NO表达的影响；ELISA法检测SDLTAs对细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达的影响；RT-qPCR法检测细胞中iNOS、NF-κB p65和IκBα mRNA的表达；Western blotting法检测细胞中p-p38、p-p65和p-JNK以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果 SDLTAs显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应。SDLTAs极显著降低细胞中NO、IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌（P < 0.01），极显著下调细胞中iNOS、NF-κB p65和IκBα mRNA的表达（P < 0.01），极显著降低细胞中p-p38、p-p65和p-JNK以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达（P < 0.01）。结论 SDLTAs可通过调节MAPK/NF-κB信号通路发挥抗炎作用。

关键词: 白刺花叶, 总生物碱, 抗炎, 作用机制

Abstract:

Objective To investigate the in vitro anti-inflammatory effects of Sophora davidii Hance leaves total alkaloids（SDLTAs）and possible molecular mechanisms. Methods The lipopolysaccharide （LPS）-induced inflammation model of RAW264.7 cells was used， and different concentrations of SDLTAs （50， 100 and 200 μg/mL） were administered， and the effect of SDLTAs on cellular NO expression was detected by the Griess method； ELISA method was used to detect the effect of SDLTAs on the expression of IL-6， TNF-α and IL-1β； The expression of iNOS， NF- κB p65 and IκBα mRNA was detected by RT-qPCR； Western blotting was used to detecte the expression of p-p38， p-p65 and p-JNK in the cells and NF- κB p65 in the nucleus. Results SDLTAs could significantly inhibit the LPS-induced inflammatory response in RAW264.7 cells. SDLTAs significantly decreased the secretion of NO， IL-6， TNF-α and IL-1β in cells （P < 0.01）， and significantly decreased the mRNA expressions of iNOS， NF-κB p65 and IκBα in cells （P < 0.01）. Significantly decreased the protein expression of p-p38， p-p65 and p-JNK in cells and NF-κB p65 in nucleus （P < 0.01）. Conclusion SDLTAs can exert anti-inflammatory effects by regulating the MAPK/NF-κB signalling pathway.

Key words: Sophora davidii （Franch.） Skeels, total alkaloid, anti-inflammation, action mechanism

中图分类号:

R285

姜盛楠,支文冰,陈静,孙婷婷,许宗仁,刘帅,张红,李晔,刘洋. 白刺花叶总生物碱通过抑制MAPK/NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应[J]. 实用医学杂志, 2024, 40(20): 2835-2840.

Shengnan JIANG,Wenbing ZHI,Jing CHEN,Tingting SUN,Zongren XU,Shuai LIU,Hong ZHANG,Ye LI,Yang LIU. Sophora davidii Hance leaves total alkaloids Attenuate Lipopolysaccharide-induced inflammatory response in RAW264.7 cell by Inhibiting the MAPK/NF-κB signaling pathway[J]. The Journal of Practical Medicine, 2024, 40(20): 2835-2840.

图/表 6

表1

表2

表3

表4

表5

图1

参考文献 28

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基因	引物序列
GAPDH	F 5′-TGGAGAAACCTGCCAAGTATGA-3′
GAPDH	R 5′-TGGAAGAATGGGAGTTGCTGT-3′
iNOS	F 5′-GGGAATCTTGGAGCGAGTTG-3′
iNOS	R 5′-GTGAGGGCTTGGCTGAGTGA-3′
NF-κB p65	F 5′-CCAAAGAAGGACACGACAGAATC-3′
NF-κB p65	R 5′-GGCAGGCTATTGCTCATCACA-3′
IκBα	F 5′-CTGAGCCGATGTCAGCAT-3′
IκBα	R 5′-CTGCCTACTAGTCTGACATG-3′

组别	细胞活力	F值	P值
空白组	100.34 ± 1.72	75.923	< 0.01
LPS-10 μg/mL组	100.90 ± 2.13
SDLTAs
50 μg/mL组	96.82 ± 1.19
100 μg/mL组	96.48 ± 0.62
200 μg/mL组	97.85 ± 1.29
300 μg/mL组	91.88 ± 0.87^*
400 μg/mL组	72.38 ± 3.93^*

组别	NO（μmol/L）	iNOS mRNA相对表达量
空白组	1.95 ± 0.12	1.17 ± 0.09
LPS-10 μg/mL组	7.35 ± 0.09^*	10.08 ± 0.16^*
LPS+SDLTAs
50 μg/mL组	3.32 ± 0.2^#	7.69 ± 0.19^#
100 μg/mL组	2.23 ± 0.15^#	6.14 ± 0.12^#
200 μg/mL组	1.66 ± 0.12^#	7.25 ± 0.41^#
F值	833.743	628.668
P值	< 0.01	< 0.01

组别	IL-6含量	IL-1β含量	TNF-α含量
空白组	214.64 ± 3.72	156.57 ± 6.16	346.13 ± 14.95
LPS-10 μg/mL组	851.97 ± 12.77^*	809.10 ± 8.56^*	1901.70 ± 22.65^*
LPS+SDLTAs
50 μg/mL组	514.30 ± 13.16^#	492.70 ± 14.06^#	755.70 ± 12.36^#
100 μg/mL组	454.65 ± 12.13^#	354.37 ± 8.70^#	658.20 ± 16.91^#
200 μg/mL组	323.11 ± 22.11^#	305.67 ± 11.76^#	587.47 ± 11.30^#
F值	893.475	1 744.972	4 242.968
P值	< 0.01	< 0.01	< 0.01

组别	NF-κB mRNA 相对表达量	IκBα mRNA 相对表达量
空白组	1.03 ± 0.23	1.00 ± 0.09
LPS-10 μg/mL组	3.50 ± 0.14^*	10.60 ± 0.08^*
LPS+SDLTAs
50 μg/mL组	1.56 ± 0.01^#	4.43 ± 0.02^#
100 μg/mL组	1.32 ± 0.28^#	5.10 ± 0.38^#
200 μg/mL组	1.95 ± 0.10^#	5.38 ± 0.81^#
F值	89.315	216.701
P值	< 0.01	< 0.01