TA-siRNA纳米凝胶靶向抑制PNI施万细胞Gzmb基因表达促进神经修复

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2024.08.014

摘要/Abstract

摘要：

目的构建TA-siRNA纳米凝胶靶向抑制施万细胞死亡。方法研究使用GEO数据库GSE244328的转录组测序数据进行生物信息学分析筛选焦亡相关基因并通过聚合酶链反应和蛋白质印记分析评估特定基因的表达水平。使用来自美国ATCC的小鼠施万细胞，采用LPS模拟炎症刺激。制备自组装TA-siRNA纳米凝胶，采用CCK8细胞增殖实验、骨架染色、划痕实验评估TA-siRNA纳米凝胶细胞功能。使用GraphPad Prism 8、ImageJ和R 4.2.1进行统计学差异分析。结果 Gzmb基因在施万细胞的焦亡过程中显著高表达（P < 0.05）。TA-siRNA纳米凝胶具有优异的生物相容性，其大小为（68.65 ± 7.35） nm，电位为-36.48 mV，可被施万细胞有效内化，且不会导致施万细胞的伸长和变形（P > 0.05）。TA-siRNA纳米凝胶能有效抑制施万细胞的Gzmb基因从而抑制施万细胞焦亡并提高施万细胞的存活率与活性（P < 0.05）。结论鉴于施万细胞焦亡在PNI中的作用，TA-siRNA纳米凝胶抑制施万细胞焦亡可能是未来PNI的一种潜在治疗策略。

关键词: 周围神经损伤, 施万细胞, 纳米凝胶

Abstract:

Objective To constructed a TA-siRNA nanogel to target the inhibition of Schwann cell death. Methods The study used the transcriptome sequencing data of GEO database GSE244328 for bioinformatics analysis to screen pyroptosis-related genes and evaluated the expression level of specific genes through polymerase chain reaction and protein imprint analysis. Mouse Schwann cells from the American ATCC were used， and LPS was used to simulate inflammatory stimulation. Self-assembled TA-siRNA nanogels were prepared， and CCK8 kit experiments， cytoskeleton staining， and scratch experiments were used to evaluate the cell function of TA-siRNA nanogels. GraphPad Prism 8， ImageJ， and R 4.2.1 were used for statistical difference analysis， with P < 0.05 as the statistical difference standard. Results The Gzmb gene was significantly （P < 0.05） highly expressed during the pyroptosis of Schwann cells. TA-siRNA nanogel had excellent biocompatibility with a size of 68.65 ± 7.35 nm and a potential of -36.48 mV， which could be effectively internalized by Schwann cells and did not lead to the elongation and deformation of Schwann cells （P > 0.05）. TA-siRNA nanogel could effectively inhibit the Gzmb gene of Schwann cells， thus inhibiting the death of Schwann cells and increasing the survival rate and activity of Schwann cells （P < 0.05）. Conclusion Given the role of Schwann cells in PNI， TA-siRNA nanogel inhibition of Schwann cell pyroptosis may be a potential treatment strategy for PNI in the future.

Key words: peripheral nerve injury, Schwann cells, nanogel

中图分类号:

R641

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图/表 6

表1

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种属	基因别名	NCBI登录号	上游引物F	下游引物R	PCR产物长度（bp）
Mus musculus	GAPDH	nm_008084.4	AAGAAGGTGGTGAAGCAGG	GAAGGTGGAAGAGTGGGAGT	111
Mus musculus	Trem2	nm_031254.3	GGCACCAACTTCAGATCCTCA	CTCCCAGGATAGGTGGGCTT	189
Mus musculus	Gzmb	nm_013542.3	GAAGCCAGGAGATGTGTGCT	GCACGTTTGGTCTTTGGGTC	183
Mus musculus	Aim2	nm_001013779.2	GGTTATTAAGGCTGCAAAGCCA	TTCAAGGAGCAGCATCAGGA	103

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