卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1对卵巢颗粒细胞的调控

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2023.21.004

实用医学杂志 ›› 2023, Vol. 39 ›› Issue (21): 2709-2717.doi: 10.3969/j.issn.1006-5725.2023.21.004

卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1对卵巢颗粒细胞的调控

柯慧,颜礼征(),张宇,毛记龙,姚宇飞

海南医学院第一附属医院海南省人类生殖与遗传重点实验室，海南医学院第一附属医院生殖医学科，海南医学院第一附属医院海南省地方病（地中海贫血）临床医学研究中心，海南医学院生殖健康与相关疾病研究与转化教育部重点实验室，海南医学院第一附属医院海口市人类遗传资源保藏重点实验室（海口 570102 ）

收稿日期:2023-07-12 出版日期:2023-11-10 发布日期:2023-12-19
通讯作者: 颜礼征 E-mail:yanli2heng@126.com
基金资助:
海南省自然科学基金项目(821RC702);海南省省级临床医学中心项目

Regulation of ovarian granulosa cell by SIRT1 in women with poor ovarian response

Hui KE,Lizheng YAN(),Yu ZHANG,Jilong MAO,Yufei YAO

Hainan Provincial Key Laboratory for Human Reproductive Medicine and Genetic Research，the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University，Hainan Medical University； Department of Reproductive Medicine，the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University，Hainan Medical University； Hainan Provincial Clinical Research Center for Thalassemia，the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University，Hainan Medical University； Key Laboratory of Reproductive Health Diseases Research and Translation（Hainan Medical University），Ministry of Education； Haikou Key Laboratory for Preservation of Human Genetic Resource，the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University，Hainan Medical University，Haikou 570102，China

Received:2023-07-12 Online:2023-11-10 Published:2023-12-19
Contact: Lizheng YAN E-mail:yanli2heng@126.com

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1（SIRT1）对卵巢颗粒细胞的调控。方法本研究纳入行IVF/ICSI-ET助孕的女性共60例，其中卵巢低反应（POR）组和卵巢正常反应（NOR）组各30例。采用密度梯度离心法分离纯化卵泡液中的颗粒细胞。分别使用SIRT1激动剂白藜芦醇（RESV）或抑制剂EX527处理POR组颗粒细胞，对照组为不使用药物处理的颗粒细胞。采用qPCR检测颗粒细胞SIRT1和类固醇激素合成关键酶（StAR、CYP19、CYP17）的mRNA水平。采用Western blot检测颗粒细胞SIRT1、类固醇激素合成关键酶蛋白和凋亡相关蛋白（Bcl-2、Caspase-3）的水平。TUNEL法检测颗粒细胞的凋亡率。化学发光法检测颗粒细胞培养液中雌二醇水平。结果 POR组颗粒细胞SIRT1 mRNA和蛋白水平低于NOR组（P = 0.003，P < 0.001）。RESV上调SIRT1 mRNA和蛋白水平（P < 0.001），上调类固醇激素合成关键酶mRNA和蛋白水平（P < 0.05），EX527下调SIRT1 mRNA和蛋白水平（P = 0.023、0.001），下调类固醇激素合成关键酶mRNA和蛋白水平（P < 0.05）。RESV作用颗粒细胞后，细胞凋亡率降低（P = 0.000），Bcl-2蛋白水平上升（P < 0.001），Caspase-3蛋白水平下降（P < 0.001）；EX527作用颗粒细胞后，细胞凋亡率升高（P < 0.001），Bcl-2蛋白水平下降（P = 0.003），Caspase-3蛋白水平上升（P < 0.001）。结论 POR女性颗粒细胞SIRT1水平低于NOR女性。RESV增加SIRT1表达。SIRT1抑制颗粒细胞凋亡，提高类固醇激素合成关键酶水平，促进颗粒细胞合成雌二醇。因此，SIRT1激活剂如RESV可能成为改善POR女性卵巢反应性，增加获卵数的治疗药物。

关键词: 卵巢低反应, 沉默信息调节因子1, 卵巢颗粒细胞, 凋亡

Abstract:

Objective To investigate the regulation of SIRT1 on ovarian granulosa cell in women with poor ovarian response. Methods A total of 60 women who underwent IVF/ICSI-ET were included in this study， 30 women in poor ovarian response （POR） group and 30 women in normal ovarian response （NOR） group. The granulosa cells in follicular fluid were isolated and purified by density gradient centrifugation. The granulosa cells of POR group were treated with SIRT1 agonist resveratrol （RESV） or inhibitor EX527， respectively， and the control group was granulosa cells treated without drugs. mRNA levels of SIRT1 and key enzymes of steroid hormone synthesis （StAR， CYP19， CYP17） in granulosa cells were detected by qPCR. The levels of SIRT1， steroid hormone synthesis key enzymes protein and apoptosis-related protein （Bcl-2， Caspase-3） in granulosa cells were detected by Western blot. The apoptosis rate of granulosa cells was detected by TUNEL method. Determination of estradiol in granulosa cell culture medium by chemiluminescence. Results The mRNA and protein levels of SIRT1 in granulosa cells in POR group were lower than those in NOR group （P = 0.003， P < 0.001）. RESV up-regulated SIRT1 mRNA and protein levels （P < 0.001）， up-regulated mRNA and protein levels of steroid hormone synthesis key enzyme （P < 0.05）. EX527 down-regulated SIRT1 mRNA and protein levels （P = 0.023， 0.001）， down-regulated mRNA and protein levels of steroid hormone synthesis key enzymes （P < 0.05）. After RESV treatment， the apoptosis rate of granulosa cells was decreased （P < 0.001）， the Bcl-2 protein level was increased （P < 0.001）， and the Caspase-3 protein level was decreased （P < 0.001）. After EX527 treatment， the apoptosis rate of granulosa cells was increased （P < 0.001）， the Bcl-2 protein level was decreased （P = 0.003）， and the Caspase-3 protein level was increased （P < 0.001）. Conclusion The SIRT1 level in granulosa cells of POR women was lower than that of NOR women. RESV up-regulated SIRT1 expression in granulosa cells. SIRT1 inhibited granulosa cell apoptosis， increased the level of steroid hormone synthesis key enzyme， and promoted estradiol synthesis in granulosa cell. Therefore， SIRT1 activators such as RESV may be a therapeutic agent to improve ovarian reactivity and increase the number of oocytes obtained in women with POR.

Key words: poor ovarian response, silent information regulator 1, ovarian granulosa cell, apoptosis

中图分类号:

R711.75

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图/表 17

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项目	POR组	NOR组	t值	P值
年龄（岁）	32.26 ± 1.87	32.26 ± 1.87	-	-
体质量指数（kg/m²）	20.66 ± 0.89	20.36 ± 1.11	1.143	0.258
HCG日E₂水平（pmol/L）	2 370 ± 539	11 502 ± 2 527	-19.352	< 0.001
获卵数	2.73 ± 0.45	10.33 ± 1.88	-21.517	<0.001

基因	引物序列
SIRT1
正向Forward	5'-GGAGCAGATTAGTAGGCGGC-3'
反向Reverse	5'-CTTGGACTCTGGCATGTCCC-3'
CYP17
正向Forward	5'-TGGCTCTCTTGCTGCTTACC-3'
反向Reverse	5'-GGTGGCCGACAATCACTGTA-3'
CYP19
正向Forward	5'-TGTGCAATGTGCTGTGGATTC-3'
反向Reverse	5'-TCTCAATGAAGGCATGGGGG-3'
StAR
正向Forward	5'-CAGACTTCGGGAACATGCCT-3'
反向Reverse	5'-GGGACAGGACCTGGTTGATG-3'
β?actin
正向Forward	5'-TTGTTACAGGAAGTCCCTTGCC-3'
反向Reverse	5'-ATGCTATCACCTCCCCTGTGTG-3'

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卵巢低反应女性中沉默信息调节因子1对卵巢颗粒细胞的调控

Regulation of ovarian granulosa cell by SIRT1 in women with poor ovarian response

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