收稿日期: 2023-06-27
网络出版日期: 2024-03-08
基金资助
国家自然科学基金面上项目(82270492);国家自然科学基金地区项目(82060139);国家自然科学基金青年项目(81900273);宁夏医科大学校级重点项目(XZ2022004);宁夏回族自治区重点研发计划项目(2020BFH02001);宁夏回族自治区重点研发一般项目(2019BEG03006);中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2019PT330002)
Effect of LncRNA SNHG1 on homocysteine⁃induced podocytespyrophosis
Received date: 2023-06-27
Online published: 2024-03-08
目的 探讨lncRNA SNHG1在同型半胱氨酸诱导足细胞焦亡中的作用。 方法 选取Cbs +/-小鼠随机分成2组，设置正常饮食组（ND）和高蛋氨酸饮食组（HMD），Western blot检测Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3的蛋白表达水平。体外培养小鼠肾小球足细胞，设置对照组（Control， 0 μmol/L Hcy）和同型半胱氨酸干预组（Hcy， 80 μmol/L Hcy）；足细胞转染慢病毒后设置lncSNHG1过表达阴性对照组（OE-NC）和lncSNHG1过表达组（OE-SNHG1）；lncSNHG1过表达阴性对照+同型半胱氨酸干预组（OE-NC+Hcy）和lncSNHG1过表达+同型半胱氨酸干预组（OE-SNHG1+Hcy），干预细胞48 h后，实时荧光定量PCR检测Hcy干预的足细胞中lncSNHG1表达水平；Western blot和免疫荧光技术检测足细胞中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1、NLRP3及GSDMD和GSDMD-N表达水平；ELISA检测足细胞中焦亡介导的炎症相关因子IL-1β和IL-18含量。 结果 （1）动物实验中：与正常饮食组（ND）相比，高蛋氨酸饮食组（HMD）中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高；（2）细胞实验中：与对照组（Control）相比，同型半胱氨酸干预组（Hcy）中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高，焦亡介导炎症因子IL-1β和IL-18含量增高；（3）细胞实验中：与对照组（Control）相比，同型半胱氨酸干预组（Hcy）中lncSNHG1表达水平增高；足细胞转染lncSNHG1慢病毒后，与Control组及OE-NC组相比，OE-SNHG1组lncSNHG1表达水平增高；（4）细胞实验中：与OE-NC+Hcy组相比，OE-SNHG1+Hcy组中焦亡相关蛋白Caspase-1、Cleaved Caspase-1和NLRP3及GSDMD、GSDMD-N表达水平增高，焦亡介导炎症因子IL-1β和IL-18含量增高。 结论 lncRNA SNHG1在Hcy诱导的足细胞焦亡过程中起到促进作用。
关键词： 同型半胱氨酸; 足细胞; 核仁小RNA宿主基因1; 焦亡
张正皓 , 马芳 , 张晴 , 夏童童 , 刘虹麟 , 白志刚 , 卢冠军 , 张竞文 , 彭红建 , 姜怡邓 , 马胜超 . LncRNA SNHG1在同型半胱氨酸致足细胞焦亡中的作用[J]. 实用医学杂志, 2024 , 40(4) : 476 -482 . DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2024.04.007
Objective To investigate the role of lncRNA SNHG1 in homocysteine-induced pyroptosis of podocyte. Methods Cbs +/- mice were randomly divided into two groups： a normal diet group （ND） and a high methionine diet group （HMD）. Western blotting was used to detect the protein expression levels of Caspase-1， Cleaved Caspase-1， and NLRP3. Mouse renal glomerular podocytes were cultured in vitro， and then assigned into a control group （Control， 0 μmol/L Hcy） and a homocysteine intervention group（Hcy， 80 μmol/L Hcy）. Western blotting was used to detect the protein expression levels of Caspase-1， Cleaved Caspase-1， and NLRP3. Mouse renal glomerular podocyion group （OE-NC + Hcy） and the lncSNHG1 overexpression + homocysteine intervention group （OE-SNHG1 + Hcy） were also established.After 48 hours of intervention， Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the expression of lncSNHG1 in podocytes after Hcy intervention. Western blot was used to detect the expressions of Caspase-1，Cleaved Caspase-3 and NLRP3. Immunofluorescence was used to detect the expression levels of GSDMD and GSDMD-N. ELISA was used to detect the contents of IL-1β and IL-18. Results （1）In the animal experiments， the expression levels of pyroptosis-related proteins Caspase-1， Cleaved Caspase-1，NLRP3， GSDMD， and GSDMD-N were all increased in the HMD group compared with the ND group. （2）In the cellular experiments， the expression levels of Caspase-1，Cleaved Caspase-1，NLRP3， GSDMD， and GSDMD-N were all increased in the Hcy group compared with the Control group， and the contents of pyroptosis-mediated inflammatory factors IL-1β and IL-18 were increased as well. （3） In the cellular experiments， the expression of lncSNHG1 was increased in the Hcy group compared with the control group. After transduction with lncSNHG1 lentivirus， the expression of lncSNHG1 was increased in the OE-SNHG1 group，compared with the control group and the OE-NC group. （4）In the cellular experiments， the expressions of pyroptosis-related proteins Caspase-1，Cleaved Caspase-1， NLRP3， GSDMD，and GSDMD-N were increased compared with the OE-NC+Hcy group， and the contents of pyroptosis-mediated inflammatory factors IL-1β and IL-18 were increased in the OE-SNHG1+Hcy group. Conclusion These results indicate that lncSNHG1 may play a role in promoting Hcy induced podocytepyroptosis.
Key words： homocysteine; podocyte; small nucleolar RNA host gene 1; pyroptosis
| 1 | MUTAIRI F AL . Hyperhomocysteinemia： Clinical Insights［J］. J Cent Nerv Syst Dis， 2020， 12： 1179573520962230. doi:10.1177/1179573520962230 |
| 2 | MIZUNO T ， HOSHINO T ， ISHIZUKA K ， et al . Hyperhomocysteinemia Increases Vascular Risk in Stroke Patients with Chronic Kidney Disease［J］. J Atheroscler Thromb， 2022： 11-26. doi:10.5551/jat.63849 |
| 3 | 赵若蓓， 罗宇珍， 潘玲， 等 . 足突融合与IgA肾病临床病理特征及肾功能的关系［J］. 实用医学杂志， 2021，37（10）： 1268-1271. doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2021.10.007 |
| 4 | ZHANG M ， YUAN J ， DONG R ， et al . Hyperhomocysteinemia exacerbates ischemia-reperfusion injury-induced acute kidney injury by mediating oxidative stress， DNA damage， JNK pathway， and apoptosis［J］. Open Life Sci， 2021， 16： 537-543. doi:10.1515/biol-2021-0054 |
| 5 | CUI Y ， ZHANG F ， ZHU C ， et al . Upregulated lncRNA SNHG1 contributes to progression of non-small cell lung cancer through inhibition of miR-101-3p and activation of Wnt/β-catenin signaling pathway［J］. Oncotarget， 2017， 8（11）： 17785-17794. doi:10.18632/oncotarget.14854 |
| 6 | THIN K Z ， TU J C ， RAVEENDRAN S . Long non-coding SNHG1 in cancer［J］. Clin Chim Acta， 2019， 494：38-47. doi:10.1016/j.cca.2019.03.002 |
| 7 | NAGATA M . Podocyte injury and its consequences［J］. Kidney international， 2016， 89（6）： 1221-1230. doi:10.1016/j.kint.2016.01.012 |
| 8 | 张鸿，梁顺，杜玥，等 . 核因子κB受体活化因子通过TRPC6-NFATc1信号通路介导足细胞损伤［J］. 实用医学杂志， 2019，35（1）：25-29，34. doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2019.01.006 |
| 9 | CONLEY S M ， ABAIS-BATTAD J M ， YUAN X ， et al . Contribution of guanine nucleotide exchange factor Vav2 to NLRP3 inflammasome activation in mouse podocytes during hyperhomocysteinemia［J］. Free Radic Biol Med， 2017， 106：236-244. doi:10.1016/j.freeradbiomed.2017.02.027 |
| 10 | KAYAGAKI N ， STOWE I B ， LEE B L ， et al . Caspase-llcleavesgasdermin D for non-canonical inflammasomesignalling［J］. Nature， 2015， 526（7575）： 666-671. doi:10.1038/nature15541 |
| 11 | AN X ， ZHANG Y ， CAO Y ， et al . Punicalagin protects diabetic nephropathy by inhibiting pyroptosis based on TXNIP/NLRP3 pathway［J］. Nutrients， 2020， 12（5）： 1516. doi:10.3390/nu12051516 |
| 12 | LIN J ， CHENG A ， CHENG K ， et al . New insights into the mechanisms of pyroptosis and implications for diabetic kidney disease［J］. Int J Mol Sci， 2020， 21（19）： 7057. doi:10.3390/ijms21197057 |
| 13 | 李冰，熊正方，郭亚民 . 长链非编码胰RNA ROR通过notch1蛋白调控腺癌细胞的增殖凋亡［J］. 实用医学杂志， 2017， 33（12）： 1922-1927. |
| 14 | ZHANG H ， ZHOU D ， YING M ， et al . Expression of long non-coding RNA （lncRNA） small nucleolar RNA host gene 1 （SNHG1） exacerbates hepatocellular carcinoma through suppressing miR-195［J］. Med Sci Monit， 2016， 22（12）： 4820-4829. doi:10.12659/msm.898574 |
| 15 | LEI J ， FU Y ， ZHUANG Y ， et al . LncRNA SNHG1 alleviates IL-1β-induced osteoarthritis by inhibiting miR-16-5pmediated p38 MAPK and NF-κB signaling pathways［J］. Biosci Rep， 2019， 39（9）： BSR20191523. doi:10.1042/bsr20191523 |
| 16 | XU J H ， RUI Y ， HUA X H ， et al . lncRNA SNHG1 promotes basal bladder cancer invasion via interaction with PP2A catalytic subunit and induction of autophagy［J］. Mol Ther Nucleic Acids， 2020， 21： 354-366. doi:10.1016/j.omtn.2020.06.010 |
| 17 | ZHAO S ， WANG Y ， LUO M ， et al . Long noncoding RNA small nucleolar RNA host gene 1 （SNHG1） promotes renal cell carcinoma progression and metastasis by negatively regulating miR-137［J］. Med Sci Monit， 2018， 24： 3824-3831. doi:10.12659/msm.910866 |
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