维生素B12通过下调自噬增强HDM处理的人气道上皮细胞中ZO-1的表达

doi:10.3969/j.issn.1006-5725.2025.21.007

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨维生素B12（VB12）对屋尘螨（HDM）处理的人气道上皮细胞株（Beas-2b）中闭锁小带蛋白-1（ZO-1）表达的影响及其作用机制。方法用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养人气道上皮细胞株Beas-2b。将Beas-2b分为四组：Control、VB12、HDM、VB12 + HDM。使用NC-siRNA、ATG5-siRNA、BECN1-siRNA和mcherry-EGFP-LC3等慢病毒转染Beas-2b。各转染组细胞用相应慢病毒（MOI = 20）转染细胞12 h后换新鲜培养基，并用嘌呤霉素（1 μg/mL）进行筛选，获得稳定转染细胞株。分别用VB12（20 μg/mL）和HDM（50 μg/mL）刺激细胞24 h。免疫荧光和蛋白质印迹检测ZO-1、自噬相关蛋白5（ATG5）、苄氯素1（BECN1）和微管相关蛋白轻链3（LC3）的蛋白水平。共聚焦显微镜观察人气道上皮细胞自噬情况。结果与Control组比较，HDM组的ZO-1表达降低（P < 0.05），而ATG5、BECN1和LC3的表达升高（P < 0.05）；与HDM组相比，VB12 + HDM组ZO-1表达升高（P < 0.05），ATG5、BECN1和LC3的表达降低（P < 0.01），且自噬体形成减少（P < 0.05）；ATG5和BECN1敲减细胞株中，HDM处理后ZO-1表达增加（P < 0.05）。结论 VB12可通过下调自噬增加HDM处理的人气道上皮细胞中ZO-1的表达，其作用机制与ATG5和BECN1信号途径相关。

关键词: 维生素B12, 闭锁小带蛋白-1, 自噬, 自噬相关蛋白5, 苄氯素1

Abstract:

Objective To investigate the effect of vitamin B12 （VB12） on the expression of zonula occludens?1 （ZO?1） in house dust mite （HDM）?treated human airway epithelial cell line （Beas?2b） and its underlying mechanism. Methods Beas?2b cells were cultured in DMEM high?glucose medium containing 10% fetal bovine serum. The cells were divided into four groups： control， VB12， HDM， and VB12 + HDM. Beas?2b cells were transfected with lentiviruses carrying NC?siRNA， ATG5?siRNA， BECN1?siRNA， and mCherry?EGFP?LC3. After 12 hours of transfection （MOI = 20）， the medium was replaced with fresh medium， and stable transfected cell lines were selected using puromycin （1 μg/mL）. Cells were stimulated with VB12 （20 μg/mL） and HDM （50 μg/mL） for 24 hours. The protein levels of ZO?1， autophagy?related protein 5 （ATG5）， BECN1 and microtubule?associated protein light chain 3 （LC3） were detected by immunofluorescence and Western blot. Autophagy in human airway epithelial cells was observed using confocal microscopy. Results Compared with the control group， the expression of ZO?1 in the HDM group was lower （P < 0.05）， while the expressions of ATG5， BECN1， and LC3 were higher （P < 0.05）. Compared with the HDM group， the VB12 + HDM group showed increased ZO?1 expression （P < 0.05）， decreased expressions of ATG5， BECN1， and LC3 （P < 0.01）， and reduced autophagosome formation （P < 0.05）. In ATG5? and BECN1?knockdown cell lines， ZO?1 expression increased after HDM treatment （P < 0.05）. Conclusion Vb12 can enhance ZO?1 expression in HDM?treated human airway epithelial cells by down?regulating autophagy， and its mechanism is associated with the ATG5 and BECN1 signaling pathways.

Key words: vitamin b12, zonula occludens-1, autophagy, ATG5, BECN1

中图分类号:

R563

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图/表 4

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