实用医学杂志 ›› 2023, Vol. 39 ›› Issue (8): 936-943.doi: 10.3969/j.issn.1006⁃5725.2023.08.003
钟华1 曾梅青1 周玉婷1 何舜卿1 卢秉慧2
Department of Ultraso⁃ nography,the First Affiliated Hospital of Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510800,China
Transfection of human cervical cancer cell HeLa by ultrasound microbubble contrast agent carrying pcD⁃ NA⁃STC1
ZHONG Hua*,ZENG Meiqing,ZHOU Yuting,HE Shunqing,LU Binghui.
广东药科大学附属第一医院1 超声诊断科,2 中医科(广州 510800)
摘要:
目的 观察超声微泡造影剂携带 pcDNA⁃STC1 转染人宫颈癌细胞 HeLa 后增殖、转移、侵袭, 血管生成以及 PI3K/AKT 信号通路变化。方法 利用 GEPIA 数据库分析宫颈癌组织 STC1 的表达水平、患者的预后生存期。选择 2019 年 1-10 月在我院诊治的宫颈癌患者 80 例作为研究对象,收集癌组织和癌旁 组织,qRT⁃PCR 检测 STC1 mRNA 的表达,并分析 STC1 mRNA 表达与患者临床病理因素的关系;HeLa 细胞分组:空白对照组:HeLa 细胞正常培养,不做任何处理。阴性对照组(HeLa⁃pcDNA⁃NC):5%微泡浓度+2 μg 空载质粒+无血清 DMEM 培养基。实验组(HeLa⁃pcDNA⁃STC1):5%微泡浓度+2 μg pcDNA⁃STC1 质粒+ 无血清 DMEM 培养基。MTT 法及癌细胞单克隆形成数目检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell 小室实验检测细胞侵袭能力;Matrigel 体外成管实验检测细胞的血管生成能力;Western blot 法检测 p⁃PI3K、p⁃AKT、基质金属蛋白酶⁃2(MMP⁃2)/基质金属蛋白酶⁃9(MMP⁃9)、血管内皮生长因子 (VEGF)、血管生成素 2(Ang2)的表达。结果 GEPIA 数据库显示宫颈癌组织 STC1 的表达水平低于正常 组织,且预后生存期与 STC1 的表达水平呈负相关;与癌旁正常宫颈组织相比,宫颈癌组织和 STC1 mRNA 下调,且 miR⁃574⁃5p 水平与 STC1 水平呈负相关,与肿瘤分化程度、FIGO 分期、淋巴结转移有明显的相关性,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组 48 h、72 h、96 h OD 值降低,细胞克隆数极少,迁移率降低,细 胞侵袭数减少,血管生成能力下降,MMP ⁃2、MMP ⁃9、VEGF、Ang2、p ⁃PI3K、p ⁃AKT 蛋白表达下调(P < 0.05)。结论 超声微泡造影剂携带 pcDNA⁃STC1 转染能够明显抑制人宫颈癌细胞 HeLa 增殖、转移、侵袭 和血管生成,其作用机制可能是通过抑制PI3K/AKT 信号通路实现的。