实用医学杂志 ›› 2022, Vol. 38 ›› Issue (18): 2309-2317.doi: 10.3969/j.issn.1006⁃5725.2022.18.011
田晨1 刘志辉2 孟繁荣2 李华2 何湘蓉2 胡锦兴2
1 广州医科大学研究生院（广州 510120）；2 广州市胸科医院肺研所（广州 510120）
Mechanism of CSE ⁃induced up ⁃regulation of MUC5AC in 16HBE cells by transcriptomics
TIAN Chen*， LIU Zhihui，MENG Fanrong，LI Hua，HE Xiangrong，HU Jinxing.
Graduate School of Guangzhou Medical Uni⁃ versity，Guangzhou 510120，China
摘要：
目的 本实验旨在利用转录组测序技术探索参与香烟烟雾提取物（CSE）诱导 16HBE 细胞 MUC5AC 上调的信号通路及其分子机制，为寻找新的慢性阻塞性肺疾病（COPD）黏液高分泌药物作用靶点 提供理论依据。方法 利用转录组测序技术检测CSE 引起16HBE 细胞差异表达的基因（DEGs），通过生物 信息学分析挖掘出可能参与 CSE 诱导 16HBE 细胞 MUC5AC 上调的信号通路及相关基因。利用 RT⁃qPCR 技术验证所筛选的信号通路中相关基因转录水平；利用信号通路激动剂及siRNA干扰技术分别验证该信号 通路及相关基因是否参与CSE诱导的16HBE细胞MUC5AC上调过程。结果 转录组测序共检测到2 567个 DEGs，生物信息学分析结果显示16HBE细胞中MAPK信号通路、WNT信号通路、PI3K⁃Akt等信号通路在受到 CSE刺激后表达异常。RT⁃qPCR结果显示CSE刺激16HBE后WNT4、WNT5B、WNT6、WNT10A基因的转录水 平较对照组分别下调了0.885、0.893、0.705、0.618倍（P < 0.05），WNT9A较对照组上调3.727倍（P < 0.05），与转录组测序结果一致。激活经典WNT信号通路后，16HBE细胞 MUC5AC 转录水平较对照组上调 3.197 倍 （P = 0.0313）。而在小分子干扰实验中，WNT5B siRNA 组+CSE 组 MUC5AC mRNA 较阴性对照+CSE 组上调 2.092 倍（P = 0.0162）。结论 非经典 WNT 信号通路中的 WNT5B 在 CSE 刺激 16HBE 细胞后下调，并参与 CSE诱导的MUC5AC的表达上调。
