实用医学杂志 ›› 2021, Vol. 37 ›› Issue (10): 1250-1256.doi: 10.3969/j.issn.1006⁃5725.2021.10.004
超声微泡介导Caprin⁃1⁃KO转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期及cyclinD1、cyclinD2表达的影响
陈佳琳, 林翠燕, 赖美燕, 林健如, 张慧, 过新民
暨南大学附属广州红十字会医院超声医学科(广州 510220)
Effects of the proliferation,cycle and the expression of cyclinD1 and cyclinD2 in human hepatoma HepG2 cells after Caprin ⁃ 1⁃KO transfection mediated by ultrasound ⁃microbubbles
CHEN Jialin,LIN Cuiyan, LAI Meiyan,LIN Jianru,ZHANG Hui,GUO Xinmin.
Department of Ultrasound Medicine,Guangzhou Red Cross Hospital,Ji′nan University,Guangzhou 510220,China
摘要:
目的 构建筛选最优 Caprin⁃1 敲除质粒并探讨超声微泡介导其转染对人肝癌 HepG2 细胞中 cyclinD1、cyclinD2的表达及细胞增殖、周期的影响。方法 构建 Caprin⁃1敲除质粒KO⁃1、KO⁃2,测序鉴定重组质粒,将目的质粒转染入人肝癌 HepG2 细胞,超声转染条件利用前期研究成果,免疫印迹法(WB)筛选最优质粒,实时荧光定量 PCR(qPCR)检测抑制 Caprin⁃1 表达后 cyclinD1 及 cyclinD2 表达情况,细胞增殖实 验(CCK⁃8 法)及流式细胞术(FCM)检测抑制 Caprin⁃1 表达对细胞增殖与周期的影响。结果 设计 Caprin⁃ 1 敲除质粒Caprin⁃1⁃KO⁃1、Caprin⁃1⁃KO⁃2引物序列,提取质粒经过电泳及测序,鉴定质粒构建成功。转染目的质粒后,KO⁃2 组 Caprin⁃1 表达显著降低,与阴性对照组(NC)、KO⁃1 组比较,差异有统计学意义(P < 0.05);且抑制 Caprin⁃1 表达明显抑制 HepG2 细胞的增殖,阻滞了细胞周期,cyclinD1,cyclinD2 表达均明显下调,差异均有统计学意义(P < 0.05)。结论 超声微泡介导Caprin⁃1⁃KO转染人肝癌HepG2细胞,Caprin⁃1⁃ KO 对人肝癌 HepG2 细胞增殖有抑制作用并使细胞周期发生阻滞,cyclinD1 及 cyclinD2 表达下降,为进一步 研究Caprin⁃1在肝癌发病机理中的作用提供思路。