实用医学杂志 ›› 2021, Vol. 37 ›› Issue (2): 170-181.doi: 10.3969/j.issn.1006⁃5725.2021.02.009
汪洋,张辉,马东波, 伍冬冬, 邓翔, 李芳, 郭胜存, 吴秋歌
Department of Respiratory and Criti⁃ cal Care Medicine,the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China
摘要:
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin⁃3⁃gallate,EGCG)体外抑制埃可病 毒 9 型(Echovirus 9,ECHO9)的作用机制及其特异性底物热休克蛋白 70(Heat shock protein 70,Hsp70)在 其中的作用,为埃可病毒抑制剂的天然产物研发提供理论依据。方法 根据细胞毒性实验确定使用的 EGCG的最大工作浓度,采用病毒滴度 TCID50 检测法、细胞毒性检测法、Western blot 和实时荧光定量 PCR 方法(qPCR)分别检测 EGCG 在体外模型上对 ECHO9 的增殖、蛋白表达和基因转录的抑制效果。检测 RNAi 干扰Hsp70 的表达后病毒的生长曲线。结果 EGCG 对 Vero 细胞的毒性呈现明显的梯度依赖效应, 最大无毒浓度为25 μmol/L,且20 μmol/L的EGCG浓度下,细胞上清中病毒滴度抑制率达62%;同时Western blot结果显示EGCG使病毒G蛋白受到显著抑制;qPCR对细胞中埃可病毒G蛋白的转录本的检测结果表明 EGCG 使病毒 G 蛋白的转录效率下降了85.3%。RNAi干扰Hsp70后,病毒的滴度下降了两个数量级。结论 EGCG 体外对ECHO9有较好的抗病毒作用,且可能是通过抑制其特异性底物Hsp70实现的。